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细胞培养技术及常见问题 复旦大学附属中山医院 中国生物医药技术服务中心 ※实验室细胞培养技术 一、细胞培养的设备条件 无菌室 密闭性好，方便消毒；干燥透气，但工作时和外界无空气对流。 超净工作台 CO2培养箱 定期清洁消毒，保持湿度。 培养器皿的清洗与消毒 浸酸6小时以上→流水冲洗15次→双蒸水浸洗3次→烘干、包装→消毒。 二、培养基基本要求 1、营养成分 氨基酸 12种必须氨基酸，或需要添加谷氨酰胺。 单糖 葡萄糖吸收最高，半乳糖最低。神经元培养需另外添加。 维生素 无机盐及微量元素 2、促生长因子和激素 3、渗透压 260~320mOsm/kg范围内都适宜。 4、PH 7.2~7.4 5、必须使用三蒸去离子水 6、血清 牛血清适用于大多数哺乳类动物细胞 可分为 ：小牛血清、新生牛血清、胎牛血清 质量标准 可向厂家索取质检报告 ＊总蛋白含量：不低于35~45g/L ＊球蛋白含量：﹤20g/L，越低越好 ＊血红蛋白含量：越低越好 外观：土黄或棕黄色，清凉透明，无或少许沉淀，粘稠。 ＊大量沉淀物：污染或蛋白变性 ＊颜色为棕红色：血红蛋白含量高，有溶血 ＊液体稀薄：掺入的生理盐水过多 储存和使用 ＊热灭活 高质量的