RNA条带的分析.docVIP

一．RNA条带分析： 要知道RNA电泳的理想带型是： 完整的RNA琼脂糖电泳会有三条带，某些试剂盒可能会有两条带（没有最下面的5S条带）。 上面两条带应该最亮，分别代表28S和18S rRNA，且第一条带（28S）亮度应为第二条（18S)亮度的约2倍。最下面一条带最淡，为5S条带。 如果你发现最下面一条带很亮而上两条带很淡甚至没有，那就说明你的RNA发生了严重的降解。只能重新提取了。 但如果仅仅是为了检测RNA的质量，没有必要进行如此麻烦的实验，用普通的琼脂糖胶就可以了。 一般的，如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利（指条带的边缘清晰） 电泳的目的在于检测28S和18S条带的完整性和他们的比值，或者是mRNA smear的完整性。我们认为RNA的质量是好。 二.检测RNA溶液的吸光度 核酸分子中含有碱基使核酸在260nm下有最大吸收。紫外吸收是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的性质，含有嘌呤和嘧啶的物质，不论是核苷、核苷酸 或核酸都有吸收紫外光的特性。 1.280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。 2.一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。 a．当R1.82时，说明RNA中蛋白或者其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是2.