细菌分离培养、接种技术及生化.pptVIP

第三章 临床细菌学检验技术第二节 细菌分离培养与鉴定 P35;一、培养基的种类和选择(一)基本条件;(二)培养基;1.培养基的组成成分：;⑵凝固物质： 最常用的为琼脂(agar)，它是从石花菜中提出来的一种半乳糖胶，100℃溶解，40℃凝固，可利用琼脂来改变培养基的物理性状(固体或半固体)，它是理想的固体培养基的赋形剂，其本身不被细菌分解利用，也无营养作用。;⑶抑菌剂和指示剂： 不是细菌生长繁殖的必需物质，是制备细菌的选择、鉴别培养基和判断结果的需要。 常用的抑菌剂有：胆盐、煌绿、亚硫酸钠、亚硒酸钠及一些染料和某些抗生素等。 常用的指示剂有：酚红、中性红、甲基红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中国兰等酸碱指示剂，美兰为常用的氧化还原指示剂。;2.培养基的分类;基础培养基：是其他培养基的基础，如普通肉汤、 普通琼脂平板、斜面、高层 营养培养基：BAP、罗-琴培养基、吕氏血清斜面 选择培养基：SS平板、BS平板、Mac平板等 鉴别培养基：糖发酵管、MIU、KIA、TSI等 特殊培养基：厌氧培养基、高渗培养基等;3.常用培养基的制备;⑶血琼脂平板： 普通琼脂平板营养物质灭菌冷至50℃ + 5%~10%脱纤维SRbc或RRbc，摇匀，倾倒无菌平皿，冷凝后即成血平板。 常用于营养要求较高的细菌的分离纯培养和药敏。 ⑷半固体肉汤： 牛肉汤(牛肉浸膏汤)+ 0.2%~0.5%agar→加热溶化 →分装→高压灭菌→冷却即成。 常用于保存菌种和观察细菌的动力。 ;;二、分离培养 （一）细菌的分离;倾注平板法 取一定量的稀释标本加入无菌平皿，再加入冷至45℃左右的定量培养基，混匀，待凝后倒置培养。 6. 涂布法 把稀释定量被检菌液均匀涂布于琼脂平板表面。 7. 定量接种环法 　 把定量接种环沾取菌液均匀涂布于琼脂平板表面。 ;(二) 细菌的培养方法 根据临床初步诊断及待检细菌的种类，可选用不同环境条件进行培养，常用培养方法有： 1. 需氧培养： 适用于需氧菌和兼性厌氧菌，在有氧环境下35℃孵育18~24h。 2. CO2培养： 适用5%~10%CO2环境才生长良好的细菌，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、布鲁菌的首次分离培养。供给CO2的方法有： CO2培养箱、烛缸法、化学法(每升容积0.4gNaHCO3+0.35ml浓HCl)。 3.厌氧培养法：适用于厌氧菌的分离培养，常用的方法有厌氧罐法、气袋法和厌氧手套箱法等。;; (三) 细菌的生长情况 在平板上——呈菌落(colony)生长，常用于细菌分离 纯培养 在斜面上——呈菌苔或菌落生长，可用于增菌或保 存菌种。 半固体中——呈迁徙生长(有动力)。可用于观察 动力和保种。 在液体中——呈表面生长，均匀混浊生长和沉淀生 长。可用于增菌和鉴别细菌。;思考题;三、生化反应;（一）碳水化合物的代谢试验 1. 糖(醇、苷)类发酵试验 产酸(+)：丙酮酸、乳酸、甲酸等 原理：细菌 糖类 产酸产气⊕：CO2、H2 不分解：(-) 由于不同细菌菌体内的酶系统不同，可分解单糖（葡萄糖）,双糖（乳糖），多糖（淀粉）和醇类（甘露醇），糖苷（水杨苷），代谢产物也不一样，可借此来鉴别细菌。;培养基：肉膏汤+1%待试糖+指示剂→溶化调 pH7.4± →分装→高压灭菌冷后待用。 有液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。 方法：把分纯的细菌→1%糖(醇、苷)类培养基，35℃ 18~24h →观察结果。 产酸产气： 如大肠埃希菌→GS → 结果 + 产酸不产气：如伤寒b、痢疾b →GS → + - 培养基不变色 ：如卡他莫拉菌 应用：是鉴别细菌最主要和最基本的试验，特别是肠杆菌