γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物的制备及其生物活性-中国医药生物技术.PDFVIP

98 中国医药生物技术 2010 年 4 月第 5 卷第 2 期 Chin Med Biotechnol, April 2010, Vol. 5, No. 2 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2010.02.004 ·论著· γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物的制备 及其生物活性 李文娟，冯震，薛晓敏，黄静，吴自荣 【摘要】 的结果[8] 。但是仅以小分子 γ-聚谷氨酸作为载体还 目的 研究一种低毒性的顺铂复合物：γ-聚谷氨酸天冬氨 存在载药量低和载体用量大的缺点，本文采用了一 酸-顺铂复合物（γ-PGAasp-CDDP ），考察其体外性质和体内 种连接效率更高的新型药物载体：γ-聚谷氨酸-天冬 毒性，并探讨可能的作用机制。 氨酸，利用其活性基团羧基连接顺铂，制备 γ-聚谷 方法 γ-聚谷氨酸与天冬氨酸发生酰胺化反应制备 γ-聚谷 氨酸天冬氨酸-顺铂复合物，并对其体内外性质进行 氨酸-天冬氨酸复合物，核磁共振对其结构进行表征；化学 研究。 法制备 γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物；常规方法检测该 复合物稳定性；透析法研究药物缓释效果；MTT 法检测复 1 材料与方法 合物体外抗肿瘤细胞活性；流式细胞仪检测其对细胞凋亡的 1.1 材料 1.1.1 主要试剂 H-Asp （Ot t 作用；小鼠体内实验检测其体内毒性。 Bu ）-O Bu·HCl （Asp ， Mr 296.8 ）、1-乙基- （3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺 结果 成功制备 γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物，顺铂的 有效结合率达 30% ；该复合物在常温中性环境下稳定；30 h 盐酸盐（EDAC ）购自吉尔生化（上海）有限公司； 时顺铂的累计释放率达到 30% ；细胞实验表明复合物对 γ-聚谷氨酸标准品、顺铂（CDDP，纯度 99.9% ）、 Bcap-37 （人乳腺癌细胞）和 BEL7404 （人肝癌细胞）具有 噻唑蓝 （MTT ）、碘化丙啶 （PI ）购自美国 Sigma 公 显著的杀伤作用，小鼠体内实验表明该复合物的毒性比游离 司；三氟乙酸（TFA ）、邻苯二胺（OPDA ）购自上 顺铂低。 海化学试剂公司。 1.1.2 主要仪器 ELx800 酶标仪为美国 Bio-Tek 结论 γ-聚谷氨酸天冬氨酸-顺铂复合物仍然保留了游离顺 公司产品；FACScan 流式细胞仪为美国 Becton 铂的生物活性，在杀伤肿瘤细胞、引起细胞凋亡的同时，大 Dickinson 公司产品；Avance 500 MHz 核磁共振仪 大降低了体内毒副作用，其作用机制可能与实体瘤组织的高 为德国 Bruker 公司产品。 通透性、滞留效应（EPR 效应）以及药物缓释作用有关， 1.1.3 细胞系 枯草芽孢杆菌（Bacillus ．sp ）由 因此该复合物具有潜在的临床应用价值。 本实验室筛选并保存；Bcap-37 细胞（人乳腺癌细 【关键词】 药物载体； 药物释放系统； 顺铂； γ-聚 胞）、BEL7404 细胞（人肝癌细胞）购自