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荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制 Time：2010-05-17 PM 21:15　　Author:bioer　　Hits:　 1. \o 绝对定量专题 绝对定量定义??????? \o 绝对定量专题 绝对定量是用已知浓度的标准品绘制 \o 标准曲线专题 标准曲线来推算未知样品的量。 ??????? ?将标准品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，绘制 \o 标准曲线专题 标准曲线，对未知样品进行定量时，根据未知样品的CT值，即可在 \o 标准曲线专题 标准曲线中得到样品的拷贝数。*?Log(起始浓度)与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，即得到该扩增反应存在的线性关系*?由样品CT值，就可以计算出样品中所含的模板量 2. \o 绝对定量专题 绝对定量标准品标准品的一些标准*?必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增，并且扩增效率相同*?标准品必须是经过准确定量的（我们通常用的是ASP-3700紫外光/可见光微量分光光度计）* 标准品必须是标准化的（例如，同一化的细胞数）* 在每组实验时，必须用相同的阈值设定来确定CT值????????标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA，也可以是比扩增片段长的纯化后的PCR产物，当然也可以是基因组