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对照 被检血清对照（被检血清+盐水） 试管凝集抗原对照（试管抗原+盐水） 抗球蛋白血清加生理盐水对照 抗球蛋白血清加试管凝集抗原对照 抗球蛋白血清加被检血清对照 对照全部为阴性时，实验才有意义 我国试行的用于诊断人布病标准1:400及以上滴度。 注意事项 在进行Coomb’s试验时，洗涤抗原很重要，如不认真洗涤，在抗原表面上吸附血清中的某些其他蛋白物质，会干扰下一步加入抗球蛋白血清的反应，掩盖真正结果。 一般采用加入抗球蛋白血清1:20-1:50之间的稀释度。 评价 （1）布氏菌感染后，约在15天出现不完全抗体，3个月左右达到高峰。可持续一年左右。该实验可作为早期和追溯诊断。 （2）该试验特异性较强，尤其适用于诊断亚急性和慢性病人，所查抗体主要为IgG、IgA类。 （3）一般不作为常规项目，在试管凝集试验为可疑，患者又处于慢性期时，可考虑抗球蛋白试验予以诊断。 3.2.2. 4、布氏菌补体结合试验 原理：绵羊红细胞和溶血素可以形成结合物，在补体的作用下，发生溶血。在反应体系中，他们作为指示系统，与布氏菌的特异性抗原、抗体复合物竞争结合补体。如果发生溶血，说明血清中没有特异性抗体，判为阴性，即不是布病患者。 评价：主要检查IgG类抗体，特异性强，适用于各型各期病人的诊断，准确性高，敏感性差，对慢性病人有漏诊现象，操作复杂，影响因素多，难以在基层推广。 补体试验的5种成分 补体 溶血素 绵羊红血球 布氏菌抗原 待检血清（以及对照血清） 补体结合试验注意事项 血清灭活 恒温水浴箱 结果的判读 出现问题的分析 3.2.2.5、皮肤变态实验 原理：IV型变态反应，为细胞免疫。当机体受布氏菌抗原刺激后，导致T淋巴细胞致敏，致敏的T淋巴细胞再遇到相同抗原后进行分化、衍变、产生能释放各种淋巴因子的效应细胞。局部的变态反应就是各种淋巴因子综合作用的结果。 方法：前臂内侧前1/3处，酒精消毒，皮内注射布氏菌素0.1毫升，24、48小时各观察一次。 评价：呈阳性反应的人只表示受过布氏菌感染； 副作用大。 3.2.2.6、酶联免疫吸附试验（ELISA） 　　 间接酶联免疫吸附试验（iELISA） 竞争酶联免疫吸附试验（cELISA） 双抗体夹心酶联免疫吸附试验 双抗原夹心酶联免疫吸附试验 　 酶联免疫吸附试验注意事项 试验的稳定性，重复性 试验对照的设置，强、弱阳性，阴性血清对照的ct值要在规定的范围 稀释倍数 实验时的无菌操作 妥善保存有意义的样本 编号，冻存，背景资料 谢谢大家！ * 布氏菌革兰染色 3.1.6布氏菌鉴定程序 分离培养 纯分离传代 玻片凝集初步鉴定，阳性血清、因子血清凝集 H2S产生试验，CO2培养依赖试验 噬菌体裂解试验 染料抑菌试验 PCR检测 其他方法检测 生化测定 脂肪酸分析 PFGE等 布氏菌噬菌体 我国1981年起从国外引进布氏菌分型噬菌体，对鉴定布氏菌有良好使用价值，可以将布氏菌鉴定到种 目前使用的噬菌体有 　　Tb Fi BK 2 Wb R R/O R/C　　 噬菌体对布氏菌的裂解 羊种布氏菌噬菌体裂解 分离培养基 商用培养基 布氏琼脂 布氏肉汤 制备培养基 肝浸液琼脂 血琼脂培养基 胰蛋白眎琼脂培养基 半固体培养基 选择性培养基添加剂（多种抗生素） 商品添加剂 多粘菌素B 杆菌肽 放线菌酮 制霉菌素 注意：PH 7.2 ，琼脂适量，适当容器 布氏菌培养鉴定 新方法的应用 细菌生化 鉴定系统 PCR鉴定 OMP31 AMOS-PCR 双向血培养瓶 血清学检验 3.2 3.2.1 血清学诊断的意义 3.2.2 针对布病进行的检验 3.2.3 血清样本的采集和保存 3.2.1 血清学诊断的意义 ?人的布病诊断方法：综合性诊断（1）流行病学接触史：密切接触家畜、野生动物（观赏动物）、畜产品、布氏菌培养物等或生活在疫区内的居民 （2）临床症状和体征 （3）实验室检查：病原菌分离、试管凝集试验、补体结合试验、抗人球蛋白试验 具备（1）、（2）和（3）项中的任何一项检查阳性即可确定为布病病人 3.2.2 针对布病进行的检验 实验室检查阳性判定标准（1）病原菌分离：检出布鲁氏菌（2）试管凝集试验：1：100（++）及以上（3）补体结合试验：1：10（++）及以上（4）抗人球蛋白试验：1：400（++）及以上（5）虎红、平板凝集试验：出现可见凝集（6）皮内变态反应：皮试后24、48小时分别各观察一次,皮肤红肿范围有一次在2.０×2.０厘米及以上（或４.０平方厘米及以上） 虎红、平板凝集试验和皮内变态反应供初筛试验用 对已