DNA测序技术及其应用..ppt

;1;1 引言;造福人类的HGP; ;;2.第一代测序技术;化学降解法;技术路线;化学降解法刚问世时，准确性较好，也容易为普通研究人员所掌握，因此用得较多。 而且化学降解较之链终止法具有一个明显的优点，即所测序列来自原DNA分子而不是酶促合成产生的拷贝，排除了合成时造成的错误。 但化学降解法操作过程较麻烦，且用到放射性物质，逐渐被简便快速的Sanger法所代替。;双脱氧链终止法;双脱氧链末端终止法测序原理示意图; P; Sanger法因操作简便，得到广泛的应用。后来在此基础上发展出多种DNA测序技术，其中最重要的是荧光自动测序技术。 ;荧光自动测序技术;3730全自动测序仪;杂交测序技术;杂交测序检测速度快，采用标准化的高密度寡核苷酸芯片能够大幅度降低检测的成本，具有部分第二代测序技术的特点。但该方法误差较大，且不能重复测定。 通过几十年的逐步改进, 第1代测序仪的读长可以超过1000 bp, 原始数据的准确率可以高达99.999%, 测定每千碱基序列的成本是0.5 美元, 每天的数据通量可以达到600000 碱基。; 第一代测序技术在分子生物学研究中发挥过重要的作用,如人类基因组计划(human genome project,HGP)主要基于第一代DNA测序技术。目前基于荧光标记和Sanger的双脱氧链终止法原理的荧光自动测序仪仍被广泛地应用。;2.第二