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固定化的主要形式 酶能以多种方法固定于载体上,大致可分为: (1)共价结合法; (2) 吸附法; (3)交联法; (4)包埋法。 壳 聚 糖 壳聚糖(chitosan)又名氨基葡萄糖,是由2-氨基-2-脱氧-β-D-葡萄糖以β(1→4)糖苷键连接而成的直链多糖,它是目前发现的唯一的一种天然的碱性多糖。用碱脱去甲壳素2位碳上的乙酰基可得到壳聚糖。 壳聚糖分子链上的游离氨基能从酸性溶液中结合氢离子,成为带正电荷的聚电解质,破坏了分子间和分子内的氢键,从而可溶于一些低浓度无机酸和有机酸。另外壳聚糖分子结构中含羟基和氨基,使其易于进行酰化、酯化、醚化、烷基化、氧化、螯合等化学修饰和改性。 壳聚糖及其衍生物对人体无毒,具有良好的生物相容性和生物可降解性. 壳聚糖作为酶固定化载体优良性能 甲壳素/壳聚糖,能以低廉的成本从甲壳类动物的硬壳中获得,也可从海产品加工业的废物中获得。 壳聚糖分子中含丰富羟基和氨基使其易于进行化学反应而赋与其许多独特的性能,特别是其丰富的氨基与各种蛋白质的亲和力非常高;大多聚合物载体中含残存单体易使酶失活,而壳聚糖没有残存的单体。 酶固定化的成功决定于酶与固定化载体的良好结合而不破坏酶的生物催化特性。固定化载体一般应具有良好的化学稳定性和机械刚性、容易再生等基本性质,而且必须能吸附蛋白质,有能与酶表面基团相作用的功能团,具亲水性和良好的生物相容性,且可根据酶的特性做定向化学修饰。壳聚糖具备上述全部性质. 壳聚糖与其它载体的酶和细胞固定化性能比较 多孔壳聚糖微球制备及形态观察 1 试验方法 1)　壳聚糖基本性质测定 2) 壳聚糖微球的制备 3)　壳聚糖微球形态及结构观察 2　结果与讨论 1)　壳聚糖基本性质测定结果 2)　壳聚糖分子量对壳聚糖成球的影响 3)　成球条件对壳聚糖成球的影响 1　NaOH浓度对壳聚糖成球的影响 2　壳聚糖浓度对壳聚糖成球的影响 3　凝结液中处理时间对壳聚糖成球的影响 4　壳聚糖微球内部结构 3　 结　论 前 言 甲壳素和壳聚糖是天然的聚氨基葡萄糖,呈现出疏松的网状结构,在大多数溶剂中是不能溶解的.壳聚糖凝胶形成的微球具网状结构,机械性能良好,化学性质稳定,耐热性好,特别是其分子中存在的大量氨基使它能在pH6. 5以下的酸性溶液中溶解,既易与酶共价结合,又可络合金属离子,使酶少受金属离子的抑制,同时它又易于通过接枝而改性。 制备表面疏松多孔的壳聚糖微球 探讨影响壳聚糖成球的因素,制备多孔的壳聚糖微球以增加微球的表面积,增加酶分子与壳聚糖分子的接触机会,有利于壳聚糖吸附酶分子及与酶分子交联。 1 壳聚糖基本性质测定 2 壳聚糖微球的制备 1)不同分子量壳聚糖微球的制备 2)不同NaOH浓度下壳聚糖微球的制备 3)不同壳聚糖浓度的微球的制备 4)不同凝结时间的壳聚糖微球的制备 3 壳聚糖微球形态及结构观察 壳聚糖基本性质测定结果  壳聚糖分子量对壳聚糖成球的影响 分子量较小的C3制备的微球表面具有明显的疏松多孔结构,而分子量较大的C1和C2制备的微球表面结构致密,孔少且小。这可能是因为随着分子量的增加,壳聚糖分子变长,微球中壳聚糖分子之间相互结合更加紧密,导致其表面结构致密,多孔性降低。 壳聚糖微球的多孔结构及强度是影响其作为固定化酶载体的主要因素,分子量较小的C3所成的微球虽然强度不高,但其表面疏松多孔,而且可以通过增大其浓度或用戊二醛交联等方法来增加其强度。所以分子量较小的C3作为制备多孔壳聚糖微球的材料较好。 1　NaOH浓度对壳聚糖成球的影响 NaOH浓度对壳聚糖微球的形态和表面结构具有较大影响: 2. 0%的NaOH溶液所成微球表面形态不规则,球之间容易相互粘结;表面疏松多孔结构不明显 3. 0%的NaOH溶液中所成微球整体形态规则,强度较好;表面出现明显的多孔结构。 　 这主要是因为壳聚糖在酸性条件下溶解、碱性条件下沉淀. 在较低浓度的NaOH溶液中,壳聚糖微球在还未完全沉淀成球以前就已经塌陷,壳聚糖分子堆砌在一起,导致所成微球形态不好、强度较差,表面厚度不均一,凸凹不平,不能形成良好的疏松多孔结构; 当NaOH浓度增加时,壳聚糖微球迅速成形,容易形成厚度均一、形态较好、强度高的微球,此时微球表面被撑起,呈现出壳聚糖自