第17章 液相色谱法.pptVIP

* 常用溶剂: 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 * 5.选择流动相时应注意的几个问题 ①尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 ②避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子 ③试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。 ④流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 * 二、高效液相色谱法的类型 1.吸附色谱（液-固吸附色谱LSC） 以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等。较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。 常用于农药成分分离、植物色素的分离等。但不适合强极性离子型样品或同系物的分离。 * 2.分配色谱（液-液分配色谱 LLPC） 通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相,通过组分在固定液和固定相中的多次分配平衡进行分离。 分为正相色谱和反相色谱。 正相色谱：极性固定相、弱极性或非极性流 动相 — 分离中等极性化合物。 反相色谱：非极性固定相、以水为底剂加入 少量有机溶剂的极性流动相 — 分离极性小的样品。 * 表面多孔型(球形玻珠)： 孔浅、孔层厚度小、出峰 快、柱效高，但允许进样量小。 全多孔型(硅胶)：颗粒细、孔浅、传质快、柱效高，允许进样量大，为前者的5倍。 3.化学键合相色谱（CBPC ） 用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在担体表面。 反相CBPC：非极性固定相、极性流动相。 如：ODS (C18)，甲醇-水。 正相CBPC：极性固定相、非极性或弱极性流动相。 如：氨基柱，正己烷。 * 18烷基键合固定相的形成ODS (C18 ) * 化学键合固定相类型： 化学键合固定相是目前应用最广、性能最佳的固定相。 （1）硅氧碳键型： ≡Si—O—C （2）硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐 有机溶剂，应用最广。 （3）硅碳键型： ≡Si—C （4）硅氮键型： ≡Si—N * 4.离子交换色谱（IEC） 固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱的水溶液。各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。 * 5.凝胶色谱（空间排阻色谱）SEC （1）以凝胶为固定相。 （2）凝胶是一种经过交联的、具有立体网 状结构和不同孔径的多聚体的通称。 如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶； 多孔硅胶、聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶。 （3）利用凝胶的孔径与被分离组分分子间 的相对大小关系进行分离、分析，与 流动相性质无关。 * （4）凝胶具有许多尺寸的孔径。 KD=[Cs]/[Cm] 当KD=1时，为凝胶的渗透极限； 当KD=0时，为凝胶的排阻极限。 不同尺寸样品分子的分布系数KD总保持 在0-1.0之间。 * * 食品中苏丹红的检测 HPLC, Zorbax CN-C18,3.5um 4.6mm×150mm 苏丹红为化工原料,在食品中,苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ均为10ug/Kg。 * 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅 胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流速：1.5 mL/min 色谱柱：内径 50cm?2.5mm 检测器：差示折光 检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 * 稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇- 水～100%甲醇 线性梯度淋洗， 2%/min 流速：1mL/min 柱温：50 oC 柱压：70 ?104 Pa 检测器：UV检测器 * 三聚氰胺的结构式 三氯氰胺，一种塑料化工常用材料，作为食品添加剂，并没有正当的效用。但因其一个碳原子上含有3个氮，而普通蛋白质中一个碳原子上仅含有一个氮，三氯氰胺的氮含量比蛋白质还高。 C3H6N6 * * 色谱条件： Agilont TC-C18 (250mm×4.6mm 5um ) 柱温：40℃ 流速：0.8ml/min 流动相： 硫酸铵（0.02mol/L）：甲醇 =94 ：6（V：V） 检测波长：215nm 进样量：10mL