基因工程及其在医学中的应用.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第一步，从一只6岁的芬兰多塞特种母羊的乳腺中取出一个本身并没有繁殖功能的普通细胞，将这个细胞的基因分离出来。 第二步，对一头苏格兰黑脸种母羊注射促性腺激素，经过28－33小时后取出卵，尽快去核，将这只卵细胞的基因取出，换上第一只羊的乳腺细胞的基因，再将这个基因已经调包的卵细胞放电激活。这样，这只已经调了包的卵细胞就像所有正常受精的卵细胞一样进行着正常的细胞分裂。 第三步，当调包的卵细胞分裂到一定阶段，胚胎已经形成后，再将这个胚胎移植到第三只母绵羊的子宫里。第三只母绵羊经过正常的妊娠后，多利就降生了。科学家们用DNA分析法表明：多利的细胞与供体细胞相似。 从这一过程来看，多利有什么特别的呢？ 第一，克隆羊多利没有父亲，但却有着三个母亲。 第二，三个母亲中，后两个母亲只是形式上的母亲。实际上是第一个母亲向后两个母亲借东西：向第二个母亲借卵子，但把卵子中的基因主部过滤出去，换上自己的基因；向第三个母亲借子宫，就像通常所说的借腹生子。 第三，克隆羊多利实际上是第一个母亲的百分之百的复制品。因此多利实际上只有一个妈妈，而且是第一个妈妈的全息复制产品。 第四，多利的这一发生过程就叫无性繁殖。像人类这样通过阴阳和合而生的，属于有性繁殖。有性繁殖必然包含着父系和母系两个系统的基因，而多利不是这样，它只有父系或母系的单一的基因，它是第一个母亲的全息复制品。 * * 复性 RNA DNA 1、印迹技术 利用各种物理方法使电泳胶中的生物大分子转移到NC等各种膜上，使之成为固相化分子。 用放射性核素、生物素或荧光染料标记其末端或全链的已知序列的多聚核苷酸链被称为“探针”，探针可以与固定在NC膜上的核苷酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。 2、探针技术 NC膜 DNA或RNA 探针 （二）印迹技术的类别及应用 1、DNA印迹 (Southern Blotting) 2、RNA印迹 (Northern Blotting) 3、蛋白质的印迹 (Western Blotting) 用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。 用于RNA的定性定量分析。 用于蛋白质定性定量及相互作用研究。 分子杂交实验 ① ② ③ 核酸序列分析的基本原理： 化学裂解法 (Maxam-Gillbert法) DNA链的末端合成终止法 (Sanger法) 二、DNA序列分析 DNA Sequence Analysis 三、聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR) 末代沙皇尼古拉II 1918年的流行性感冒病毒 电影《侏罗纪公园》 辛普森杀妻案 （一）PCR 的故事 上述四件事情到底有什么相关呢？ 然而近二十几年来生物技术的一项新发明，把它们给连在一块了。这项技术就是“聚合酶链反应”（polymerase chain reaction，PCR） 答案是NO! PCR最大的特点是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。 PCR的发明人，一般公认是穆里斯（K. Mullis），他因此获得了1993年的诺贝尔化学奖。 Kary Banks Mullis the Pacific Coast Highway PCR的点子，据穆里斯的说法，那是在1983年春天的一个周五晚上，他开车带着女友前往乡间的小屋度周末。在蜿蜒的乡间公路上开着车，一段DNA反复复制的景像，在他的脑海里冒了出来。穆里斯原以为这样简单的想法，应该有人提出过，但搜索文献后却发现没有。 变性 95 ?C 延伸 72 ?C 退火 Tm-5 ?C 1. PCR的基本反应步骤 （二）PCR技术的工作原理及应用 模板DNA 特异性引物 耐热DNA聚合酶 dNTPs Mg2+ 2.PCR体系基本组成成分 黄石公园的热泉 1973年台湾科学家钱嘉韵从黄石公园热泉里一种嗜热菌中成功分离出耐高温的Taq DNA聚合酶。 Thermus aquaticus 5? Primer 1 5? Primer 2 Cycle 2 Cycle 1 5? 5? 5? 5? 5? 5? Template DNA 3. PCR技术的工作原理 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? Cycle 3 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5