试验三叶绿体色素的提取分离及定量测量技术.DOCVIP

实验三 叶绿体色素的提取、分离及定量测量技术 一、实验目的 学习叶绿体色素提取和分离的方法；观察叶绿体色素的理化性质；掌握用分光光度计测叶绿素含量的技术。 二、实验原理 1.高等植物的叶绿体中含有叶绿素(叶绿素a和叶绿素b)和类胡萝卜素(胡萝卜素和叶黄素)。这两类色素均不溶于水，而溶于有机溶剂，故常用酒精或丙酮提取。提取液中的叶绿体色素可用层析法加以分离，因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当溶剂推动时，不同物质的移动速度不同，便可将色素分离。 2.叶绿素是一种二羧酸的酯，可与碱起皂化作用，产生的盐能溶于水中。以此法将叶绿素和类胡萝卜素分开。 3.叶绿素吸收光量子而转变为激发态的叶绿素分子很不稳定，当它回到基态时，可以发射出红色荧光。 4.叶绿素分子中的镁可被H+所取代而成为褐色的去镁叶绿素，后者遇到Cu2+’可形成绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸制标本。 5.分光光度法是根据叶绿素对某一特定波长的可见光的吸收，用公式计算出叶绿素含量。此法精确度高，还能在未经分离的情况下分别测出叶绿素a和叶绿素b的含量。根据比尔定律，某有色溶液的光密度D与其浓度C成正比，即D=KCL，L为液层厚度。当溶液浓度以百分浓度为单位，且液层厚度为1cm时，K称为该物质的比吸收系数。 已知叶绿素a和叶绿素b在红光区的最大吸收峰分别位于663nm和64