铜绿假单胞菌解析.ppt

菌落特征 胨 20. 0g 磷酸二氢钾 1.3g 乳糖 5. 0g 牛胆盐 2.0g 氯化钠 5.0g (或去氧胆酸钠） （0.5g) 磷酸氢二钾 4. 0g 水 1000ml 除乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠外，取上述成分，混合，微温溶解，调节P H值使灭菌后为7 . 4 ± 0 . 2，煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠，分装，灭菌。 营养琼脂培养基 胨 10g 牛肉浸出粉 3g 氯化钠 5g 琼脂15~20g 水 1000ml （以营养肉汤培养基的处方及制法）取上述成分，混合，煮沸溶解后，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。 绿脓菌素 PDP斜面，是否有色素，有，用氯仿3-5ml萃取，用无菌玻璃棒搅碎培养基、混匀，色素完全在氯仿层。吸管把氯仿层移到另一试管，加入盐酸1M1ml，静置后，盐酸出现粉红为阳性，无粉红为阴性，阴性斜面培养1-2天再重新做一遍。如果仍是阴性。做下一步试验。 绿脓菌素从有机相转到酸性水相中会由蓝绿色变为粉红色。 鉴定 初步鉴定 菌体形态 菌落特征 产色素 气味 氧化酶 最终鉴定 非发酵菌生化鉴定系统 API-NE试条 * 假单胞菌属 1. 革兰氏阴性 2. 细胞单个 3. 直的或弯的杆菌 4. 0.5—1 × 1.5—4微米 5. 单鞭毛或多鞭毛 6. 有机化能异养菌 7. 呼吸代谢，永不发酵 8. 严格好氧菌 模式种：铜绿假单胞菌 1.0.5-0.8*1.5-3.0微米的杆菌 2.细胞单个 3.成对或成短链。以极生的单鞭毛运动（有二个或二个以上的极生鞭毛的细胞，但不常见） 4.在中性或碱性培养基种呈蓝色：在酸性培养基种呈红色 5.专性好氧，在硝酸盐培养基中除外。 6.最适温度约37℃。41℃生长而4℃不生长。 7.能从土壤和水中分离到 8.侵袭性弱，一般认为属条件致病菌 铜绿假单胞菌 1.正常人皮肤，尤其潮湿部位如腋下、会阴部及耳道内，呼吸道和肠道均有该菌存在，但分离率较低。 2. 医源性感染 3.术后操作感染（气管切开、保留导尿管等） 4.人、病人与病人的接触也为传播途径之一 感染途径： 当机体免疫功能受损或缺损时，可引起严重的甚至致死性的感染。 检查意义： 人及动物的皮肤、肠道、上呼吸道等处都有该菌存在。绿脓杆菌抵抗力较强，湿热55℃1小时才被杀死。 对紫外线不敏感。对多种抗生素易产生耐药性。本菌仅于人体防御功能改变或直接进入机体（如通过泌尿道插管及静脉导管、呼吸道的通气设备和其他治疗检查方法）以及混合感染时才具有致病性。 长期使用抗生素、肾上腺皮质激素、免疫抑制剂或大面积烧伤、肾功能不全、心脏病、慢性支气管肺疾患的患者易继发绿脓杆菌的感染。 绿脓杆菌是医院内感染的重要病原菌之一。 培养基成分： 牛胆盐为抑菌剂，用于抑制一些杂菌的生长 。 出处：《中国人民共和国药典》2010版二部 附录 XI J 微生物限度检查法 P114 胆盐乳糖培养基（BL） 培养基成分： 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基 胨 10g 溴化十六烷基三甲铵 0.3g 牛肉浸出粉 3g 琼脂 15~20g 氯化钠 5g 水 1000ml 除琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.5±0.1，加入琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷至60℃，倾注平皿。 溴化十六烷基三甲铵——具有优良的渗透、柔化、乳化、抗静电、生物降解性及杀菌等性能。本产品化学稳定性好， 耐热、耐光、耐压、耐强酸强碱。 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基是铜绿假单胞菌的选择性培养基，也是美国药典和中国药典等国推荐使用于食品、药品中铜绿假单胞菌检测的培养基。 书本P161 5.14 培养基成分： 书本P159 5.2 培养基成分： 绿脓菌素(pyocyanin)测定用培养基(PDP琼脂) 胨 20g 甘油 10ml 氯化镁(无水) 1.4g 琼脂 18~20g 硫酸钾 10g 水 1000ml 取胨、氯化镁和硫酸钾加入水中，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入甘油及琼脂，加热溶化，混匀，分装于试管，灭菌，置成斜面。 书本P163 5.26 样品 10g BL BL 供试液 缓冲液 1