《食品生物技术》实验指导书资料精.pdfVIP

《食品生物技术》 实 验 指 导 书 北京农学院食品科学系 张红星、徐文生编著 二 0 0 六年九月 1 实验一 质粒 DNA 的小量制备 1．目的 学会最常用的小量制备质粒 DNA 的碱裂解方法。 2 ．原理 根据共价闭合环状质粒 DNA 与线性 DNA 在拓扑学上的差异来分离。在 pH12.0∼12.5 这个狭窄 的范围内，线性 DNA 双螺旋结构解开而被变性。尽管在这项的条件下共价闭合环状质粒 DNA 也会变性，但两条互补链彼此互相盘绕，仍会紧密结合在一起。当加入 pH4.8 的乙酸钾高盐缓 冲液使 pH 恢复中性时，共价闭合环状质粒 DNA 复性快，而线性的染色体 DNA 复性缓慢，经 过离心与蛋白质和大分子 RNA 一起沉淀下去。 3 ．器材 超净工作台，接种环，酒精灯，台式离心机，旋涡混合器，微量移液取样器，1.5ml 微量离