几种显微技术的应用.pptVIP

荧光显微镜标本制作要求 载玻片 　载玻片厚度应在0.8～1.2mm之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。 盖玻片 　盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。为了加强激发光，也可用干涉盖玻片，即表面镀有氟化镁的盖玻片，它可以使荧光顺利通过，而反射激发光，这种反射的激发光又可激发标本。 标本 　组织切片或其他标本不能太厚。如太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判断。 封片剂 　封片剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.5～9.5时较亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/L pH9.0～9.5的碳酸盐缓冲液的等量混合液作封片剂。 镜油 最好使用特制的无荧光镜油。 使用荧光显微镜的注意事项 　1.严格按照荧光显微镜要求进行操作，不要随意改变程序。 　2.点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，再开始观察标本，最好在暗室中进行。 　3. 在调整光源时应戴上防护眼镜，防止紫外线对眼睛的损害。 　 4.检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，另外，标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱。 5.荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。 　6.标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。 体视显微镜的原理及操作技术 用途： 主要用于实体解剖、观察。 特点： 1.像是正立的。 2.有两个物镜，其夹角为12-15°，使标本具立体效果。 3.工作距离长。 4.焦深大，放大倍数较小，最大放大倍数为240倍。 5.物镜镜口率小，分辩率低。 6.照明方式有两种，一种是用侧光源从一侧或两侧斜照射；另一种是透射式照明，透射式照明有明暗视野之分。 7.主体上具有连续放大旋钮。 操作程序 观察 1．打开电源开关，向前推动提高电压。 2．转换观察光路，即明视场和暗视场转换。 3．将标本放于载物台上，光线若太暗或不均匀，可在旁边用侧光照明。 4．进行瞳距调节。 5．进行左右眼曲光度校正。 6.将连续变倍旋钮放在最低倍。 7.调焦，观察。 8.增大连续变倍的倍数，重新调节焦距。 9.调节孔径光阑的大小，使像达到最清晰。 10.进行标本观察与解剖。 倒置生物显微镜的使用 XDS系列倒置生物显微镜特点和用途 特点 具有长工作距离的平场消色差物镜、长工作距离的聚光镜，具有相衬装置。 用途 适合于附着在培养皿底或悬浮在培养基中的活体观察，是细胞培养、组织培养及微生物研究的必备仪器。 视场光阑 滤光片 孔径光阑 调中旋钮 摄影拉杆 环板插孔 操作技术 1.将亮度调至最小，打开开关，再将亮度调至适中。 2.将标本置于载物台上，将低倍物镜置入光路，通过目镜观察，使用粗、微调焦手轮使标本成像清晰。 3.调整双目瞳距与观察者瞳距一致。 4.聚光镜位置和中心调节。 5.孔径光阑调节。 灯位调节 相衬观察 1.将环板片插入聚光镜相应插孔中。 2.孔径光阑升至最大。 3.将相应放大倍数的相衬物镜置入光路。 4. 在一个目镜筒中换用对中目镜观察，调节对中目镜的视度调节圈，并稍调节聚光镜升降手轮，使环板上的亮圈和相板上的暗环成像同时清晰。 5.转动环板座调节螺钉，使环板和相板的中心重合。 6. 取下对中目镜，换上广角目镜，即可进行相衬观察。 第八章 几种显微技术的应用 明视场研究用显微镜的操作技术 镜检顺序 1.打开主电源开关 ，在打开之前，应先将右侧电压升降拉杆放在最低处，再打开主机开关，并逐步升高电压。 底座上发光二极管可显示当前电压值。 2.把标本固定在载物台上 3.用10X物镜对焦，将10X物镜引入光路，先粗调，再微调达到最清晰。 4.双目镜筒间距和视度差的调节 5.根据要求放大倍数，旋转物镜转换器，使所选物镜进入光程，再进行微调，使标本清晰。光亮不足，可增大电压或取掉ND滤光片。 聚光镜的调节 聚光镜位置调节 ①缩小视场光阑，视场中出现一个正多边形，若边缘不清楚，表明聚光镜的位置不合适。 ②慢慢向上或向下调整聚光镜，使多边形边缘逐渐达最清楚；这样聚光镜就处于正确位置。 视场光阑处于最大状态 缩小视场光阑 聚光镜中心位置调节 ①将视场光阑缩至较小状态。 ②旋转两个聚光镜中心调节螺丝，把正多边形的视场光阑像移到目镜中心。 ③慢慢开启视场光阑，直至目镜视场与正多边形的视场光阑像外切。 中心调节螺丝 视场光阑的调节 调节照明范围，按物镜情况缩小视场光阑，遮断多余的光线，从而获得分辨率和