酶促动力学-公开课件.pptVIP

概念 研究各种因素对酶促反应速度的影响。 影响因素包括有 底物浓度、pH、温度、 抑制剂、激活剂、酶浓度等。 影响酶促反应速率的因素： 底物浓度[S] 酶浓度[E] 反应温度 pH 值 抑制剂I 激活剂A 米氏方程的推导： 米氏方程成立条件 单底物 pH、T、[E]不变 底物为液态 [S] ＞＞ [E] 稳态（steady state） 什么是酶的抑制作用和失活作用？ 失活作用：酶变性；酶活性丧失（无选择性）。 抑制作用：酶的必需基团的化学性质改变,但并不引起酶蛋白变性的作用,而降低酶活性甚至使酶完全丧失活性的作用 引起作用的物质称为抑制剂（I）（选择性）。 研究抑制作用的意义？ 竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ： 非竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ： 反竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ： 定义：抑制剂通常以共价键与酶的必需基团相结合，使酶失活。 1 不可逆抑制作用（修饰抑制） 三、酶的抑制作用 (二) 抑制作用的类型 有机磷化合物对羟基酶的抑制 ●活性部位(active site)或活性中心(active center) ：酶分子上只有少数特异的氨基酸残基参与底物结合及催化作用，这些特异的氨基酸残基比较集中的区域，即与酶活力直接相关的区域称为酶的活性部位。 路易士气 失活的酶 巯基酶 失活的酶 酸 BAL 巯基酶 BAL与砷剂结合物 （五）一些重要的抑制剂 非专一性不可逆抑制剂 a.有机磷化合物—与酶活性直接有关的丝氨酸上的-OH牢固地结合，从而抑制某些蛋白酶或酯酶。（敌百虫、敌敌畏、农药1605等） b.有机汞、有机砷化合物—与酶蛋白上的-SH作用，从而抑制含-SH酶的活性。 （对氯汞苯甲酸） 三、酶的抑制作用 1. 不可逆抑制剂 3.重金属—Ag、Cu、Hg等盐能使大多数酶失活，加入EDTA可以除去。 4.烷化剂—这一类试剂中往往含一个活泼的卤素原子，如碘乙酸、碘乙酰胺和2，4-二硝基氟苯等，使酶蛋白中的 –SH、-NH2、-OH等发生烷基化， 失活。 5.氰化物、硫化物和CO—这类物质能与酶中的金属离子形成较为稳定的络合物，使酶的活性受到抑制。 6.青霉素—抗菌素类药物，与糖肽转肽酶活性部位Ser-OH共价结合，使酶失活。 “自杀性底物” （五）一些重要的抑制剂 三、酶的抑制作用 1. 不可逆抑制剂 竟争性抑制 非竟争性抑制 反竞争性抑制 2. 可逆抑制作用 三、酶的抑制作用 (二) 抑制作用的类型 抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析等物理方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。 根椐抑制剂与酶结合的情况，又可以分为三类 （1）竟争性抑制 抑制剂与底物的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成，使酶的活性降低。 竟争性抑制通常可以通过增大底物浓度，即提高底物的竞争能力来消除。 363 三、酶的抑制作用 (二) 抑制作用的类型 2. 可逆抑制作用 抑制剂与底物的结构相似 抑制剂与酶的结合部位与底物与酶的结合部位相同—— 酶的活性中心 *竟争性抑制举例 1.丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制 琥珀酸 琥珀酸脱氢酶 FAD FADH2 延胡索酸 磺胺类药物的抑菌机制 与对氨基苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶 二氢蝶呤啶 ＋ 对氨基苯甲酸 ＋ 谷氨酸 二氢叶酸 合成酶 二氢叶酸 人体细胞的叶酸由食物获得，不受磺胺类药物的抑制 [S][I]：高浓度的底物可解除抑制 特点 ⑴ 竞争性抑制剂往往是酶的底物结构类似物； ⑵ 抑制剂与酶的结合部位与底物与酶的结合部位相同—— 酶的活性中心 ⑶ 抑制作用可以被高浓度的底物减低以致消除； ⑷ (表观）Km值增大，Vm值不变 1/Vmax (表观）Km值增大，Vm值不变 （2） 非竟争性抑制 酶可同时与底物及抑制剂结合，即底物和抑制剂没有竞争作用。酶与抑制剂结合后，还可与底物结合；酶与底物结合后，也可再结合抑制剂，但是三元的中间产物不能进一步分解为产物，所以酶活性降低。 三、酶的抑制作用 2. 可逆抑制作用 非竞争性抑制的特点： ⑴ 非竞争性抑制剂的化学结构不一定与底物的分子结构类似； ⑵ 抑制剂与酶的活性中心外的位点结合； ⑶ 抑制剂对酶与底物的结合无影响，故底物浓度的改变对抑制程度无影响； 抑制程度取决于抑制剂的浓度 ⑷ 动力学参数：Km值不变，Vm值降低。 加入非竞争性抑制剂后，Km 不变，而Vmax减小。 加入非竞争性抑制剂后，K