蛋白质标准曲线测试方法.docVIP

试剂与器材 一、试剂 考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G―250 100 mg溶于50 mL 95%乙醇中，加入100 mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL。 二、标准和待测蛋白质溶液 1. ?标准蛋白质溶液 结晶牛血清蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度用9gl/L NaCl配制成0.1 mg/mL蛋白溶液。 三、器材 试管1.5×15 cm(×6)，试管架，移液管管0.5 mL(×2);1 mL(×2);5 mL(×1);恒温水浴;分光光度计。 操作方法 一、制作标准曲线 取7支试管，按下表平行操作。 试管编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 标准蛋白溶液（mL） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 9gl/LNaCl（mL） 0.1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 考马斯亮蓝试剂 4mL 蛋白质浓度ug/ml 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 摇匀，1h内以0号管为空白对照，在595 nm处比色 绘制标准曲线：以A595?nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。 二、未知样品蛋白质浓度测定 测定方法同上，取1样品，加4ml考马斯亮蓝溶液，使其测定值在标准曲线的直线范围内。根据所测定的A595?nm