实验四脾淋巴细胞分离及流式检测实验五流式细胞术.ppt

实验四：小鼠脾脏单个核细胞的分离 熟悉细胞分离的基本原理 掌握小鼠脾脏单个核细胞的分离的方法 掌握流式细胞术检测细胞表面标志的方法 实验五：流式细胞术 检测淋巴细胞表面标记 小鼠脾脏位于上腹部左后侧，体积较大，长条形态，属于外周免疫器官。外周血中淋巴细胞可经再循环注入脾脏等外周免疫器官的特定区域，所以富含各类免疫细胞。 解剖图 胸腺位于胸腔胸骨后、纵隔前上方，覆盖在心脏前上方的白色组织。通常小鼠鼠龄越小，胸腺体积相对越大。 取脾脏 （一）取小鼠脾脏?（3人1组） 小鼠颈椎脱位处死 用拇指和食指往下按住鼠头，另一只手抓住鼠尾，用力稍向后上方一拉，使之颈椎脱臼，造成脊髓与脑髓断离 取其后右侧卧位，消毒左侧背腹交界处皮肤，剪取脾脏并尽量将去除脂肪及筋膜组织。 实验步骤 1 2 3 4 5 6 7 8 9 可重复滤过 10 1 2 3 4 6 5 7 8 9 10 超净台下操作全过程 可重复滤过 （二）制备单个核细胞悬液： 将脾脏置于盛有5mLPBS缓冲液的平皿中，然后再置于尼龙指套中。用针芯轻轻碾磨使单个核细胞通过尼龙指套悬浮于平皿中； 吸取平皿中细胞悬液（再次用尼龙指套过滤）置于刻度离心管中，加PBS缓冲液（可冲洗培养皿）至10mL，以1500rpm离心5min。弃去上清，弹散细胞沉淀，加ACK2ml，轻轻吹打混匀并放置3-4min，以破坏红细胞。然后加PBS缓冲液至10m