原位微量BCA蛋白定量法.PDFVIP

原位微量 BCA 蛋白定量法 Peter Brescia, MSc. and Peter Banks, Ph. D., BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT 关键词：原位微量BCA、Mini-BCA、传统标准BCA 简述： 传统标准的BCA蛋白定量分析方法常规均使 用试管或者微孔板进行检测，通过对传统方法进行 改进，可使用BioTek公司的Take3TM 超微量多体 积检测板进行原位微量BCA法蛋白定量分析。待测 蛋白样品和BCA工作缓冲液按照顺序直接加在 Take3TM板的微量定量孔处、温浴，使用EpochTM 微孔板分光光度计进行检测。和传统标准BCA方法 近几年开发的一些精密的检测仪器，都可以使 （BCA工作缓冲液和蛋白质样品体积比为 20 ：1） 用短光程、微量体积的样品进行比色定量，例如 相比，该方法的蛋白检测灵敏度有明显的提高。相 NanoDrop （ThermoFisher Scientific ）。这个仪器 比与Mini-BCA分析方法，原位分析方法更加精确。 内置了蛋白质 280nm 直接定量法，这种方法可以 介绍 有效的避免浪费样品且操作简单。在直接蛋白定量 BCA 法是十分常用的蛋白质比色定量方法， 的基础上，这些仪器还发展了蛋白质比色定量法， 很多试剂供应商都提供基于比色皿和微孔板的 例如 BCA 法。通过调整蛋白质和 BCA 工作缓冲液 BCA 蛋白定量试剂盒。BCA 蛋白定量法相对于其 的相对体积比，由原来的 20 ：1 调整为 1：1，这 它比色定量法具有操作简单、稳定、灵敏度高等优 种微量定量方法转换校准曲线的工作范围，使之更 点。相对于蛋白质的固有的 280nm 吸收峰检测， 适合于微孔板或短光程检测，这种方法叫 BCA 检测法提高了蛋白检测灵敏度和特异性，消 Mini-BCA 法。然而对于这些通过把样品加在检测 除了核酸的干扰，核酸干扰在对细胞裂解物或其他 基座上的仪器来讲，蛋白质和 BCA 工作缓冲液必 生物样品进行蛋白定量时总是一个难以避免的干 须先在一个额外的试剂槽里进行混匀和温浴，然后 这样会增加操作 扰。在碱性条件下，蛋白将 Cu2+ 还原为 Cu+ ,Cu+ 才能滴加到检测基座上进行检测。 与 BCA 试剂形成紫色络合物，如图 1.其吸光值与 的复杂性，增加了样品的浪费。 蛋白浓度成正比。测定在 562nm 处的吸收值，并 这里我们介绍一下如何使用 Take3 超微量多 与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 体积检测板进行原位微量 BCA 蛋白定量法。使用 Take3 超微量多体积检测板进行 Mini-BCA 法检 测操作步骤简单，整个流程和使用典型的 96 孔微 图 1. BCA 法蛋白质定量。Cu （BCA）2 耦合 孔板检测相似，直接把 BCA 工作缓冲液和样品滴 物在 592nm 有一很强的吸收值，7700L/mol/cm。 2010年4月22日第七十五期 第 6 页，共 26 页 下一页 返回 测操作步骤简单，整个流程和使用典型的 96 孔微