氨基酸生产工艺分析.ppt

3.CO2固定 在谷氨酸产生菌中已检出两种CO2固定酶： 磷酸烯醇丙酮酸（PEP）羧化酶和苹果酸酶 PEP+CO2+GDP 草酰乙酸+GTP PEP羧化酶 丙酮酸 苹果酸 草酰乙酸 苹果酸脱氢酶 苹果酸酶 ±CO2 NAD+ NADH+H+ CO2 CO2 PEP +PEP羧化酶 丙酮酸激酶 1，6-二磷酸果糖 PEP羧化酶对PEP的表现亲和力约是丙酮酸激酶的1/10 与二磷酸果糖共同 激活PEP羧化酶 PEP浓度低 PEP易进入分解途径 乙酰-CoA浓度增加 转向CO2固定 草酰乙酸 TCA循环中间产物浓度增加 抑制PEP羧化酶 防止过剩 乙酰-CoA氧化ATP水平提高 抑制丙酮 酸激酶 所以在谷氨酸发酵中，糖的分解代谢途径与CO2固定的适当比例是提高谷氨酸对糖收率的关键问题。 生物合成和需能反应 ATP 浓度 降低 解除抑制丙酮酸激酶 氨的导入 氨的导入方式： 糖代谢中间体α-酮戊二酸还原氨基化生成谷氨酸 天冬氨酸或丙氨酸通过氨基转移作用将氨基转给α-酮戊二酸而生成 谷氨酸合成酶途径 柠檬酸 异柠檬酸 α-酮戊二酸 谷氨酸 NADPH+H+ NADP NH4+ 糖代谢中间体α-酮戊二酸还原氨基化生成谷氨酸 异柠檬酸脱氢酶：需NADP为辅酶，催化α-酮戊二酸的生成（谷氨酸的前体），并为谷氨酸脱氢酶提供辅酶 谷氨酸脱氢酶：需NADPH +H+为辅酶 活细胞中，异柠檬酸脱氢酶活性小于谷氨酸脱氢酶活性，所以NADP浓度是 实际上的限速因子 异柠檬酸脱氢酶 谷氨酸脱氢酶 黄色短杆菌中，谷氨酸脱氢酶对α-酮戊二酸和 谷氨酸表现出同促相互作用，低浓度的α-酮戊二酸和谷氨酸对此酶有显著的激活作用。 当谷氨酸浓度为100mmol/L时，抑制酶活65％，浓度为400mmol/L时抑制90％，这比其他的反馈抑制要明显的弱，因而在谷氨酸发酵中菌体内游离出来的谷氨酸浓度就要高，可以认为这个调节机制对谷氨酸生产发挥着很好的调节作用。 调节机制 调节机制 生物素 细胞膜通透性 葡萄糖 磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸 乙酰-CoA 草酰乙酸 柠檬酸 α-酮戊二酸 谷氨酸 天冬氨酸 反馈抑制 增强反馈抑制 逆转反馈抑制 反馈抑制 优先合成 生物素亚适量使得最后一代细菌 细胞变形、拉长，改变了细胞膜的 通透性，引起代谢失调，使谷氨酸 得以积累 调节机制 谷氨酸发酵中，糖代谢除受到生物素控制外，也受到NH4+的影响。 使用生物素缺乏菌，在NH4+存在时，葡萄糖以很快的消耗速度和高的收率生成谷氨酸。 当NH4+不存在时，糖的消耗速度很慢，生成物是α-酮戊二酸、丙酮酸、醋酸和琥珀酸。 （二）、谷氨酸生产的工艺流程 微生物生长动力学模型的建立 培养基的配制与灭菌 菌种的扩大培养 菌体浓度 限制性基质浓度 建立微生物生长动力学模型 发酵过程中主要参数的检测 生化反应器重要参数KLa的检测 亚硫酸钠氧化法 动态法(溶氧电极法) 发酵动力学实验  上罐实消 培养基的配制 三角瓶培养 冷却接种 固体斜面培养 发 酵 发 酵 液 发酵过程参数的控制 OD值 pH 温度 搅拌速度、 DO值 发酵过程参数测定 还原糖的测定 谷氨酸的测定 菌体形态观察 菌体浓度测定 谷氨酸生产工艺流程 pH7.0，流加尿素 调节（0.4～0.6％） 测定菌体密度，OD值不再上升时， 菌体分裂完成，约12h 前期(0~12h) 33~35℃; 中后期(3~5h)36～38℃ 通气比：1: (0.08~0.1) [100吨罐] 32 ℃,pH7.0, OD=1.0 32 ℃,pH7.0, 18~24h 生物素是许多需ATP的羧化反应中羧基的载体，羧基暂时与生物素双环系统上的一个氮原子结合，如在丙酮酸羧化酶催化丙酮酸羧化成草酰乙酸的反应中。 3. 添加中间产物的发酵以氨基酸的中间产物为原料，用微生物转化相应的氨基酸，这样可以避免氨基酸生物合成途径中的反馈抑制作用。 丝氨酸 色氨酸 蛋氨酸 异亮氨酸 4. 酶法 应用完整菌体或自微生物细胞抽提出酶类制造氨基酸 丙氨酸 天冬氨酸 酪氨酸 多巴（二羟基苯丙氨酸） 色氨酸 5-羟基－色氨酸 赖氨酸 5. 合成法 丙氨酸 天冬酰胺 甘氨酸 蛋氨酸 丝氨酸 色氨酸 苯丙氨酸 二、发酵法生产氨基酸 由于发酵法生产氨基酸，其原料廉价易得，生产条件温和，并且随着微生物代谢调节理论研究的发展，目前大部分氨基酸都以发酵法进行生产。