原药材质量标准分析方法验证讲解.docVIP

药材质量标准方法建立 1．仪器与材料 UV －1601紫外－可见分光光度计 (日本岛津 AB204-N 电子天平 (万分之一天平，METTLER TOLEDO BP211D 电子天平 （十万分之一天平，Sarlorius ） 葡萄糖 (分析纯，天津市化学试剂一厂 苯酚 (分析纯，天津市化学试剂一厂 蒽酮 分析纯，国药集团化学试剂有限公司） 硫酸 (分析纯，天津市凯信化学试剂有限公司 当归药材购于甘肃岷县，经天津药物研究院中药现代研究部张铁军研究员鉴定为伞形科植物当归Angelica sinensis(OlivDiels的干燥根，经检测符合《中华人民共和国药典》（2010版）一部的有关规定。 黄芪药材购于甘肃岷县，经天津药物研究院中药现代研究部张铁军研究员鉴定为蒙古黄芪Astragalus membranaceus(FischBge．Var ．mongholicus (Bge.Hsiao的干燥根，经检测符合《中华人民共和国药典》（2010版）一部的有关规定。 2．方法与结果 2.1药材中多糖含量测定方法 本试验采用比色法对药材中的多糖含量进行测定，并建立了含量测定方法。 2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品30.43mg ，置100ml 量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml 中含无水葡萄糖0.3043mg ）。 2.1.2 5％苯酚试剂的配制 取苯酚100g ，加铝片0.1g 和碳酸氢钠0.05g ，蒸馏，收集182℃馏分，称取此馏分5g 置棕色容量瓶中溶解后定容，存冰箱备用。 2.1.3 供试品溶液制备方法的考察与确定 水提时间的考察 分别取60℃干燥至恒重的当归及黄芪药材细粉5份，每份约0.50g ，精密称定，置索氏提取器中，用80%乙醇回流提取2小时，残渣挥干溶剂后，再继续以水分别回流提取1.0h 、2.0h 、3.0h 、4.0h 、5.0h ，反复洗至250ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1ml ，置10ml 具塞干燥试管中，采用改良后的苯酚-硫酸法测定吸光度，计算含量，结果见表1-1。 表1-1 水提不同提取时间对当归含量测定的影响结果 样品 提取时间（h ） 当归多糖含量（%） 黄芪多糖含量（%） 1 1.0 7.568 5.501 2 2.0 8.599 6.511 3 3.0 8.583 6.600 4 4.0 8.594 6.589 5 5.0 8.580 6.590 从表1-1可知，水提提取时间为2.0h 时，药材含量达到最大值且保持恒定，延长提取时间药材含量变化不大，故选择提取时间为2.0h 。 2.1.4 供试品溶液的制备 分别取60℃干燥至恒重的当归及黄芪药材细粉约0.5g ，精密称定，置索氏提取器中，用80%乙醇回流提取1小时，残渣挥干溶剂后，再继续以水回流提取2小时，反复洗涤残渣及烧瓶至250ml 量瓶中，定容至刻度，摇匀，备用。 2.1.5 最大吸收波长选择 取2.1.1项下对照品溶液，在200nm-700nm 波长间进行紫外吸收 光谱扫描，最大吸收波长为490nm ，确定选择490nm 作为检测波长。 2.1.6 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1.0ml ，2.0ml ，3.0ml ，4.0ml ，5.0ml ，6.0ml ，分别置 50ml 量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液1ml ，置具塞试管中，分别加5％苯酚溶液0.6ml ，混匀，迅速加入硫酸3.0ml ，摇匀，于90℃水浴中15分钟，取出，置冰水浴中15分钟，取出，以相应试剂为空白，照紫外－可见分光光度法（附录VA ），在490nm 的波长处测定吸光度，结果见表1-2。以吸光度为纵坐标，葡萄糖取样量为横坐标，绘制标准曲线，可得回归方程：y=0.0045x-0.0011，r=0.9995(n=6。葡萄糖在24.24～145.44 μg范围内，与吸光度呈良好的线性关系，结果见图1-1。 表1-2 葡萄糖线性范围考察 取样量(μg 吸光度 24.24 0.115 48.48 0.209 72.72 0.330 96.96 0.433 121.20 0.554 145.44 0.655 图1-1 葡萄糖标准曲线 Fig 1-1 Standard Curve of glucose 2.1.6 精密度试验 精密量取同一供试品溶液，按标准曲线项下方法操作测吸光度，重复测定6次，求得吸光度值的RSD 值为0.33%。结果见表1-3，说明仪器的精密度符合要 求。 表1-3 精密度试验结果 测定次数 吸光度A 1 0.387 2 0.386 3 0.389 4 0.388 5 0.386 6 0.386 RSD （%） 0.33 2.1.7 稳定性试验 精密量取同一供试品溶