试验名称大肠菌类的检测多管发酵法.docVIP

實驗名稱:商用快速檢驗法 一.實驗目的: 與多管醱酵法和濾膜法的實驗目的是相同的主要是來測的水質中的大腸菌類數。但是基於前兩者實驗時間商用快速檢驗法顯得時間來的快。 廣泛應用於食品，水質污染，醫藥檢驗上 二.實驗原理： 本實驗利用兩種特殊培養基來快速檢測大腸菌類第一個是＂Chromocult agar and MacConkey agar。其中Chromocult agar含有兩種特殊酵素基質，其中一種基質(salmon-gal)會與大腸菌類特有的＂半乳糖酵素＂(galactosidase)反應使菌類生成紅色；而另一種特殊基質(X-gluc)會與大腸菌類生成的葡萄糖酵(glucuronidase)反應呈深藍色的菌落。 其他腸內菌因為沒有這些特殊酵素因此在培養基中呈現白色或無色菌落。 三.實驗器材： 試劑1.二段水2.污水處理廠之水樣 培養基:Chromocult coliform3.94克 玻璃培養皿6個、螺紋玻璃試管6支、錐形瓶1個、量筒、電磁加熱攪拌器、取藥勺、秤藥紙、吸球、吸量管。 四.實驗步驟： 先至污水處理廠取水樣，之後將Chromocult coliform取3.94克與150克之蒸餾水裝在燒杯於電磁加熱攪拌器攪拌及加熱。加熱至沸騰之後靜至常溫，之後做大腸桿菌的稀釋：取1ｍL之水樣於9ｍL蒸餾水攪拌進行10倍稀釋，之後在取10-1稀釋濃度的1mL＋9mL的蒸餾水攪拌進行10倍稀釋為10-2以此類推至10-5。 然後再降溫於常溫的培養基倒入六個螺紋玻璃試管中(每個約為２５ｍL)，之後用吸量管吸取1ｍL之各倍稀釋水樣分別注入６個螺紋玻璃管中(並使搖晃均勻)之後將６個螺紋玻璃管倒入６個培養皿中(用標籤註記稀釋倍數)，將培養皿放入恆溫箱中靜至24小時候。結果如有紅色代表該培養皿有大腸菌類的菌落。(因為這次實驗並無製作MacConkey agar，所以沒有產生另外一種特殊基質，因而無藍色的菌落) 隔天至實驗室數各種稀釋倍數菌落。 五、實驗結果： 採樣來源:廢水處理廠 稀釋倍數 結果圖片 大腸菌類菌落數 大腸菌類總菌數 原液 3300(CFU/100mL) 33x100x1/1=3300(CFU/100mL) 10-1 無法計數 10-2 由於沒有紅色菌落，無法計數 10-3 由於沒有紅色菌落，無法計數 10-4 由於沒有紅色菌落，無法計數 10-5 由於沒有紅色菌落，無法計數 參考公式： 計算出之菌數x 100　　 大腸菌數(CFU/100ml)＝────────── X 稀釋倍數 加入水樣體積(mL) 問題討論 1.試討論使用Chromocult coliform agar 培養基之原理、優缺點及其適用性？ (1)Chromocult coliform agar 培養基中含有兩種特殊的酵素基質，其中一種基質會與大腸菌類特有的半乳糖酵素反應使菌類生成紅色；而另一種特殊基質會與大腸菌類生成的葡萄糖酵反應呈深藍色的菌落。其他腸內菌因為沒有這些特殊酵素因此在培養基中呈現白色或無色菌落。 (2)優點：方法簡單又快速。 (3) 可用於食品，水質污染，醫藥檢驗上。 2.解釋以Chromocult coliform agar 培養基培養大腸菌類之實驗結果，並說明你們這組培養基上是否有其它非大腸菌類(即其它顏色)的微生物？ 實驗結果只有原液呈現紅色的菌落有大腸菌類，10-1無法計數，其它在培養基中呈現白色或無色菌落。 3.解釋MacConkey培養基上(粉)紅色菌落與無色菌落所代表的意義為何？ (1)紅色菌落：大腸桿菌群具有發酵乳糖的能力。 (2)無色菌落：痢疾、傷寒和副傷寒桿菌等微生物不能發酵乳糖，不產生酸。 4.比較多管醱酵法、濾膜法及商用快速檢驗水檢驗大腸菌類之優缺點，你覺得商用快速檢驗法在方法上是否比較簡易？ 是，因為其它方法，有時會因繁瑣實驗步驟或不良水質特性影響量測結果，商用快速檢驗法則方法簡單又能快速取得正確數據。 七、心得感想 憲民:這次的實驗有別於前兩者的實驗來的快速許多,可是做完的結果,只有原液有紅色的菌落,讓我們覺得很納悶,是否是因為取樣的地方,水質的關係。 還是我們在操作上有何失誤！而在調製培養基時等待水樣的加入很怕培養基會凝固，所以大家都手忙腳亂ＸＤ！ 奕權：這次的實驗就跟實驗的名字一樣快速，讓我們做了一個小時多就結束了，但實驗結果有點淒慘，只有一個有大腸菌落，本來想說會很多的說，跟想的不太一樣，不過這次實驗大家分工合作，過程還蠻