试验四尿肌酐的测定-陕师大-运动与健康试验教学中心-陕西师范大学.pptVIP

实验四 尿肌酐的定量测定  (碱性苦味酸法) 复习和巩固尿肌酐的生成机理及其生化评定的意义 学习尿肌酐测定方法 掌握尿肌酐系数指标的计算及其在运动实践中的应用。 无蛋白尿液中的肌酐与碱性苦味酸盐反应，经“Jaffe”氏反应生成红色的苦味酸肌酐，其生成量与肌酐含量成正比，用比色法即可求出尿中肌酐含量。 三、试剂 饱和苦味酸溶液：称取苦味酸15g置于大烧杯中，加蒸馏水至1000ml，加热助溶，冷却至室温，瓶底若有结晶析出，表示已饱和，取上层清夜备用，储存在棕色瓶中。 10%氢氧化钠溶液 碱性苦味酸试剂：将饱和苦味酸和10%氢氧化钠溶液按5:1体积比混合，临用时配制。 肌酐标准贮存液（1ml=1mg）：称取纯肌酐0.1g置于100ml容量瓶中，加10%盐酸溶解稀释至刻度。此溶液在4℃冰箱内可以长期保存。 肌酐标准应用液（1ml=0.1mg）：准确量取贮存液10ml于100ml的容量瓶中，加入10%盐酸10ml，再加蒸馏水至刻度。 此溶液可以在4℃冰箱内保存1周。 收集受试者24h尿液，混匀后取0.1ml置大试管中，加9.9ml蒸馏水，摇匀。 计算公式： 显色反应10-15分钟内比色，如果时间过长，尿液中其它物质能与碱性苦味酸起非特异性反应而影响结果。 如测定管显色过深，应再将稀释尿液后测定，其结果乘以稀释倍数。 七、指标应用 正常人尿肌酐日排出量：男子1.0~1.8g，女子0.7~1.0g。24h每千克体重排出的尿肌酐毫克数称尿肌酐系数。正常人尿肌酐系数为：男子18~32mg/kg体重，女子10~ 25mg/kg体重 尿肌酐日排出量与肌肉中磷酸肌酸和肌酸的含量有关，运动员尿肌酐系数高于常人，一般为25~40mg/kg体重。不同项目的运动员其系数也不同，力量、速度项目运动员尿肌酐系数可高达36~42mg/kg体重，且尿肌酐的日排出量与运动成绩高度相关。 在运动员机能评定中，尿肌酐系数可作为力量素质与速度素质的评定、选材、训练效果的检测指标，尿肌酐系数高是肌肉机能好的反映，反之，可能是肌肉机能下降的表现。 运动生物化学实验课件 陕西师范大学体育学院实验教学示范中心 一、 实验目的 二、实验原理 肌酐 + 碱性苦味酸 Jaffe氏反应 苦味酸肌酐（红色复合物） （520nm处有一吸收峰） 四、实验操作 1、制备稀释尿液（1:100） 2、尿肌酐浓度的测定 取3只大试管，编号，按表1操作： 充分混匀后，放置10min，以空白管调零，520nm波长比色 1 1 1 — 4.5 5.0 0.2 0.2 0.2 5 — — — 0.5 — 肌酐标准应用液（ml） 测定管 标准管 空白管 表1 尿肌酐的测定 OD测 尿肌酐（mg%）== ------------------- × 200 OD标（0.12） 24小时尿肌酐量（mg） 尿肌酐系数== ---------------------------------------- 体重（Kg） 五、实验结果 六、注意事项 运动生物化学实验课件 陕西师范大学体育学院实验教学示范中心