生物化学简明教程第四版04核酸.pptVIP

* 3.6.3 mRNA和 hnRNA 原核细胞mRNA 真核细胞mRNA 5′端无帽子结构 5′端有帽子结构 （翻译活性有关） 3′端没有或仅有少于10个聚腺苷酸 3′端有约200个聚腺苷酸（转移到核糖体的过程有关） * mRNA 的分子结构 原核生物 mRNA 特征： 先导区 +翻译区（多顺反子）+ 末端序列 真核生物 mRNA 特征： 帽子 （ m7G-5 ′ ppp5 ′-N-3 ′p ） +单顺反子+尾巴 （polyA） 原核细胞 mRNA 的结构特点 5′ 3′ 顺反子 顺反子 顺反子 插入顺序 插入顺序 先导区 末端顺序 真核细胞 mRNA 的结构特点 AAAAAAA-OH 5′ “帽子” PolyA 3′ 顺反子 m7G5 ′ ppp5 ′ Nm-3 ′ p * 3.7 核酸及核苷酸的性质 分子大小: DNA Mr: 106 ～ 109 或更大 性状： DNA 为白色纤维状固体，而 RNA 为白色粉末。 溶解度： DNA 和 RNA 均不溶于一般的有机溶剂，微溶于水，但它们的钠盐在水中溶解度较大。 RNA Mr :104 ～ 106 或更大 3.7.1 一般的理化性质 黏度： DNA的极高， RNA的黏度较小。 水解性： RNA 能被稀碱水解（与2 ′-OH 有关）；在酸性条件下，磷酸酯键比糖苷键更稳定，酸水解DNA首先生成无嘌呤酸 。 * 3.7.2 紫外吸收性质 由于核酸中碱基的共轭双键，所以对紫外光有强烈吸收，最大吸收峰在260nm附近，利用这一特性可进行核酸的定量测定。 * 首先根据A260/A280的比值判断核酸样品的纯度 纯DNA：A260/A280=1.8 纯RNA：A260/A280=2.0 （若样品中含有杂蛋白或苯酚，则A260/A280比值明显降低） 纯的核酸样品可根据260nm的光吸收值算出其含量 若260nm光吸收值为1相当于: 50μg/ml双螺旋DNA 40μg/ml单链DNA或RNA 20μg/ml寡核苷酸。 * 1cm光径比色杯，260nm光吸收值: 1μg/mL DNA:0.020 1μg/mL RNA:0.024 氢键 碱基堆集力（base-stacking forces） 磷酸基上负电荷被胞内组蛋白或正离子中和 碱基处于疏水环境中 3.7.3 核酸结构的稳定性 * 3.7.4 变性作用 1．变性（denaturation） 核酸变性:是指核酸的空间构象被破坏,氢键断裂, 生物活性丧失的现象。 DNA分子变性： DNA分子由双链结构解链成单链的过程。 引起核酸变性的因素 ：热、酸碱和光辐射等 热变性：因加热而导致核酸的变性。 化学变性：因加入化学试剂而引起的变性。 * （1）热变性 结构：螺旋→线团 理化性质：紫外吸收↑ 黏度↓浮力密度↑ 生物活性：生物活性↓或丧失 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 * （2）熔点（Tm） Tm: 熔点，熔解温度， 变性温度，解链温度 Tm: DNA双链解开一半时的温度。 增色效应：当DNA从双螺旋结构变为单链的无规卷曲状态时，它在260nm处的吸收便增加的现象。 * ① DNA中G-C对的含量 ; ②盐离子强度; ③ pH值(＜5.0脱嘌呤,＞11.3DNA完全变性); ④变性剂（甲酰胺、尿素、甲醛等）。 (3) 影响Tm值的因素 * 经验式: (G+C)%=(Tm-69.3)×2.44 * 3.7.5 核酸的复性（renaturation） （1）复性 理化性质: 减色效应↓ 粘度↑ 高于Tm值5℃ 复性 也称退火 生物活性得到部分恢复 * （2）影响复性的因素 ① 温度（T-25℃） ② 单链片段的浓度 ③单链片段的长度 ④ 单链片段的复杂性 ⑤ 溶液的离子强度 * * 3.7.6 核酸的杂交及应用 定义 在退火后，不同来源的DNA互补区形成双链，或DNA单链和RNA单链的互补区形成DNA-RNA杂合双链的过程称分子杂交。 DNA-DNADNA-RNARNA-RNA * 探针（probe） 指能与特定靶分子发生特异性相互作用，并能被特殊方法所检测的分子。 例如抗原-抗体、生物素-亲和素等均可看成是探针与靶分子的相互作用。基因探针 指能与特定核苷酸序列发生特异互补杂交，杂交后又能被特殊方法检测的已知被标记（同位素或非同位素标记）的核苷酸链。Southern印迹法Northern印迹法DNA芯片 * 3.8 核酸的序列测定 3.8.1 链终止法测序技术