调控胶质瘤细胞氧化应激实验研究.pptVIP

* 基于这些设想，我们设计了一下实验 * 胎盘蓝技术检测h2o2处理细胞后细胞死亡情况，图中实线代表基因敲出细胞，虚线代表野生细胞，可见XBP1基因敲出细胞对H2O2的敏感性明显高于野生型细胞，在h2o2为1mM时ko细胞死亡50%，而wt细胞死亡10%左右，2mM时候，ko细胞几乎100%死亡，wt细胞死亡不足20%。 * 接下来我们用流式细胞技术检测线粒体膜电位，以此来反应细胞损伤，可见h2o2在KO细胞中诱导MMP下降更明显，LNAC可以抑制H2O2诱导的MMP下降。 * 上述实验结果显示XBP1基因缺失可以增强对氧化应激的敏感性，但是这种敏感性增强是否只局限在氧化应激，我们又用3种化疗药物进行验证，PTL是一阵活性氧诱导剂，处理细胞24h后，胎盘蓝检测细胞死亡，发现其结果与H2O2实验非常类似，KO细胞对PTL诱导的细胞死亡远远高于wt细胞。 * 接下来我们采用其它两种化疗药物VP16和FK228，结果发现，这两种药物诱导的细胞死亡在wt细胞和ko细胞没有明显区别。说明XBP1基因缺失引起的对氧化应激敏感为特异性的。 * 用流式细胞术检测MMP下降情况可见KO细胞PTL诱导的MMP下降更明显，LNAC明显抑制MMP下降 * XBP1基因缺失可以选择性增强细胞对ros的敏感性，这张增强作用是否伴随细胞内ros蓄积增高，因此我们检测了H2O2处理后细胞内ROS的蓄积情况，DCF