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荧光定量PCR问题疑难解答（一） 两天我做标准曲线，线性关系还行，R平方0.998。但是扩增效率只有80%，另外扩增曲线也不是太光滑。2.我用SYBR作为荧光染料，样品的荧光强度也挺低的，只有100-200左右。 A：曲线不光滑有时跟染料的量相关，可以加大看看，或者就是扩增产物太少了。 1. PCR反应效率差：引物，试剂PCR条件的原因。 做realtime-pcr优化体系很重要，你的扩增效率低。可以增加Mg离子的浓度，如果其他条件都好了，还不行，那就是引物的原因，那你就只能重新设计引物了。 2. PCR中混入影响反应的物质： 模板提取方法需要改进 3. 样品稀释不准确： 这很重要，
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