毛细管区带电泳检测抗EGFR抗体的电荷异质性.pdf

第 34卷 第 12期 分析测试学报 Vo1．34No．12 2015年 12月 FENXICESHIXUEBAO(JournalofInstrumentalAnalysis) 1414～1418 doi：10．3969／j．issn．1004—4957．2015．12．015 毛细管区带电泳检测抗 EGFR抗体的电荷异质性 柯 志，周冬梅 ，徐 军，孙文正，杨 彬 (广东东阳光药业有限公司，广东 东莞 523867) 摘 要：建立了抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体电荷异质性的检测方法。采用毛细管区带电泳(CZE)模式， 考察了分离缓冲液浓度和 pH值 、添加剂、分离电压、毛细管温度对主峰与酸碱性变体分离度的影响。以 380mmol·L 6-氨基 己酸 (EACA，pH 6．0)为分离缓冲液，0．1％羟丙基 甲基纤维素 (HPMC)和 1．9 mmol·L。三亚乙基四胺 (TETA)作为添加剂，分离电压 25kV，分离时间8min，毛细管温度20℃条件下， 电荷变体能够得到良好分离，且在0．1—1mg·mL 范围内线性关系良好 ，相关系数均大于0．99，主成分、 酸 、碱变体 1和碱变体2的定量下限(LOQ)分别为30．0，150．2，125．2，93．3 g·L～，重复性和中间精密 度RSD值小于2％，回收率为95．4％～105．4％。该方法简单 、快速、成本低，可以满足抗EGFR抗体的电荷 异质性检测要求。 关键词：毛细管区带电泳；电荷异质性 ；抗 EGFR抗体；添加剂 中图分类号：0657．8；$852．43 文献标识码：A 文章编号：1004—4957(2015)12—1414—05 ChargeVariantsDeterminationofAnti——EGFR AntibodybyCapillary ZoneElectrophoresis KEZhi，ZHOU Dong—mei，XUJun，SUENWen—chen，YANG Bin (SunshineLakePharmaCo．，Ltd．，Dongguan 523867，China) Abstract：A simpleandrapidcapillaryzoneelectrophoresismethodwasdevelopedforchargevariants determinationofanti—epidemralgrowthfactorreceptor(EGFR)antibody．Toobtainbetterresolution ofantibodychargevariantsandlessanalysistime，anumberofseparationparameterswereinvestiga— ted，includingconcentrationandpH valueofseparationbuffer，concenrtationofadditives，separa— tionvoltageandtemperatureofcapillary．Theoptimizedconditionswereasfollows：separationbuffer： pH6．0380mmol·L 6-aminocaproicacid(EACA)containing0．1％ hydroxypropylmethylcellu— lose(HPMC)and1．9mmol·L triethylenetetramine(TETA)；appliedseparationvoltage：25kV； capillarytemperature：20oC．Undertheoptimizedconditions，thehighestresolutionwasobtaineda— mongallhtechargevariantsin8min．Meanwhile，