凝胶层析原理.pdf

苏州市海崴生物科技有限公司 Suzhou Haiwei Bioscience Co.,Ltd 凝胶层析原理 凝胶层析（Gel filtration ，GF ）是分配层析的一种形式，是使样品混合物流经一定孔径的填料，利 用不同分子在溶液中的有效尺寸的差别来加以分开的层析方法。凝胶层析有许多其他的称谓，如体积 排阻层析（Size Exclusion Chromatography, SEC ）、分子筛层析（Molecular Sieve Chromatography ）、凝胶 渗透层析（Gel Permeation Chromatography ）、凝胶排斥层析（Gel Exclusion Chromatography ）和凝胶过 滤层析（Gel Filtration Chromatography ）等等。 凝胶层析的用途主要的应用对象是大分子物料，特别是蛋白质混合物。它相对成本低、操作简便， 具有相对较大规模操作的能力。也可进行产物的定性(如分子量)、产物纯度的估算和各种分子相互作 用的估算。 1、原理 体积排阻层析用的介质一般具有三维网状结构，如图 1 为琼脂糖凝胶的内部网络结构。介质颗 粒与颗粒之间有一定的空隙。当溶质随流动相流经柱床内的多孔介质时，直径小于介质孔径的分子能 够进入介质的孔道中，而大于孔径的大分子则无法进入，图 2 （a ）由于介质的孔径本身具有一定的分 布，因此不同直径的分子流经不同的路径。这种由于体积差异而形成的流经路径的不同，最后导致了 不同大小物质的分离。如图 2 （b ）所示，三种分子量逐渐递增的物质依次出峰。 图 1 琼脂糖凝胶的内部电镜照片 地址：苏州市相城区阳澄湖镇东横港街9 号 TEL：0512 1 / 5 ADD ：No.9 Donghenggang Road Yangcheng lake Suzhou FAX：0512 Jiangsu P.R. China 苏州市海崴生物科技有限公司 Suzhou Haiwei Bioscience Co.,Ltd （a ） （b ） 图2 分子筛层析示意图 生物分子的大小与相对分子量直接相关，因此体积排阻层析可以分离不同分子量大小的生物物质。 对于一定的凝胶介质，生物分子均可以分为三类：第一类是分子大小大于介质的孔径，完全不能进入 孔道的分子。这类分子只能从介质的空隙中通过，因此流程最短，受到的阻力也最小，首先从层析柱 中洗脱下来。不能进入到凝胶网络内部的最小分子的相对分子量，称为排阻极限。这时的洗脱体积就 等于介质颗粒之间的空隙体积 V 。第二类是能够完全进入介质孔道内部的分子。这类分子的分子量较 0 地址：苏州市相城区阳澄湖镇东横港街9 号 TEL：0512 2 / 5 ADD ：No.9 Donghenggang Road Yangcheng lake Suzhou FAX：0512 Jiangsu P.R. China 苏州市海崴生物科技有限公司