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- 2019-07-07 发布于天津
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免疫印迹常见问题解答问题一背景脏表现为普遍的背景较高或者是经过到秒的曝光后出现非特异条带原因解决方法一抗没有稀释在合适的缓冲液中或是稀释比例不对合适的封闭剂封闭后膜在推荐浓度的抗体中孵育过夜抗体稀释在恰当浓度的封闭剂溶液中多克隆抗体和兔单抗用稀释时信噪比最高鼠单抗用脱脂牛奶稀释时信噪比最高对于特定的抗体请参考各自的产品说明选用推荐的稀释液所用的印迹膜不适合用于化学发光法检测选用高质量的硝酸纤维素膜或是膜测试并选择表现出高特异结合效果并且低背景的膜目前所测试过的尼龙膜均不适合印迹检测印迹膜封闭不够
Western免疫印迹常见问题解答
问题一：背景脏
表现为普遍的背景较高或者是经过1到30秒的曝光后出现非特异条带。
原因
解决方法
一抗没有稀释在合适的缓冲液中或是稀释比例不对
合适的封闭剂封闭后，膜在推荐浓度的抗体中4°C孵育过夜（抗体稀释在恰当浓度的封闭剂-TBS/T溶液中）。多克隆抗体和兔单抗用5% BSA稀释时，信噪比最高。鼠单抗用5%脱脂牛奶稀释时，信噪比最高。对于特定的抗体请参考各自的产品说明选用推荐的稀释液。
所用的印迹膜不适合用于化学发光法检测
选用高质量的硝酸纤维素膜或是PVDF膜。测试并选择表现出高特异结合效果并且低背景的膜。目前所测试过的尼龙膜均不适合Western印迹
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