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物理交联再生丝素膜组织工程角膜的生物相容性研究 张晓峰 刘铁连 杨吉成 夏蔚 钟蕾 孙正太 王英明 夏静 【摘要】 背景 角膜组织工程生物材料在体内应当具备透明性、一定的 机械强度、生物相容性和缓慢降解的特点。丝素膜生物材料具备这些特征。目 的研究采用物理交联再生丝素膜构建组织工程角膜的可行性。方法用常规 培养法培养人角膜上皮细胞（CECs）,将对数生长期的CECs在用家蚕丝制备的 物理交联再生丝素膜上进行培养，分别于培养后24、48、72 h在倒置显微镜、 扫描电子显微镜下观察CECs的生长状态和形态学，并与细胞培养板培养的人 CECs形态进行对照。MTT法每H检测和记录再生丝素膜培养后人CECs的增生 情况，流式细胞仪检测再生丝素膜培养人CECs的细胞周期和凋亡率。将再生丝 素膜4nrnix3nini植入新西兰白兔右眼角膜基质层间，于术后1个月、2个月时 裂隙灯下对手术眼眼表进行检查，术后2个月摘除兔眼并制备移植眼角膜组织切 片行组织病理学检查，观察再牛丝素膜材料的降解情况及角膜新牛血管（CNV） 的生长情况。采用免疫组织化学染色法检测术后1个月、2个月CD34在移植眼 角膜组织中的表达，并与正常眼进行对照。结果 在24、48、72h3个时间点, 倒置显微镜、扫描电子显微镜下见再生丝素膜培养的人CECs与细胞培养板培养 法培养的人CECs形态结构无明显差别。再生丝素膜或细胞培养板培养CECs在 1、2、3、4、5、6、7d各个时间点 心。值相比较差异无统计学意义（*0.641, P0.05）o再生丝素膜组和细胞培养板培养的CECs凋亡率分别为1.8%、2.0%, 细胞G2/G1期分别为1.956、1.945。再生丝素膜角膜植入后2个月时，再生丝素 膜为排列整齐的胶原组织替代，角膜内新生血管和炎性细胞均少于移植后1个 月。角膜免疫组织化学染色检测显示再生丝素膜槓入角膜后1个月、2个月CD34 表达量均明显低于Ad-VEGF165诱导的阳性对照片，而与正常的角膜相比差异无 统计学意义（P0.05） o术后1个月与术后2个月比较，角膜中CD34阳性率的 差异无统计学意义（P0.05）。结论物理交联再生?丝素膜构建组织工程角膜 可行，再生丝素膜与角膜组织生物相容性良好，再生丝素膜植入兔角膜基质后无 DOI： 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2011.09.003 基金项H：国家重点基础研究发展计划（973计划）项H （2005CB623900）：苏州大学页学发展基金项 目（EE134702） 作者单位:215006苏州大学附属第一医院眼科（张晓峰、夏蔚、钟蕾、孙正太、王英明、夏静）；邮 编？苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室（刘铁连、杨吉成） 通信作者:张晓峰,Email： zhanglasik@ 明显的炎症反应和新生血管。 【关键词】丝素膜/物理交联再生；角膜；组织工程；生物相容性；角 膜上皮细胞；角膜移植；角膜新生血管 中图分类号 R772.2 Q81 Biocompatibility of physico-crosslinked regenerated silk fibroin film as tissue engineered cornea ZHANG Xiao-feng, LIU Tie-lian, YANG Ji-cheng, XIA Wei, ZHONG Lei, SUN Zheng-tai^ WANG Ying-ming^ XIA Jing. Department of Ophthalmology Affiliated First Hospital ofSoochow University, Suzhou 215006, China Corresponding author： ZHANG Xiao-feng, Email: zhanglasik@ [Abstract] Background Biomaterials for comeal tissue engineering must demonstrate several critical features for potential utility in vivo, including transparency, mechanical integrity, biocompatibility and slow biodegradation. Silk film biomaterial had been characterized to meet these functional requirements. Objective This study was to investigate the feasibility of phys