第10章 免疫分析相关仪器.docVIP

PAGE PAGE 7 目 录 TOC \o 1-3 \n \p \h \z \u 第九章 免疫分析相关仪器 第一节 酶免疫分析仪 一、酶免疫分析仪的基本结构及工作原理 二、酶免疫分析仪的性能评价和维护 三、酶免疫分析仪的临床应用 第二节 发光免疫分析仪 一、发光免疫分析仪的基本结构及工作原理 二、发光免疫分析仪的临床应用 第三节 免疫浊度分析仪 一、免疫浊度分析仪的基本原理与基本结构 二、免疫浊度分析仪的临床应用 第四节 时间分辨分析仪 一、时间分辨分析仪基本原理与基本结构 三、时间分辨分析仪的临床应用 第五节 放射免疫分析仪 一、放射免疫分析的基本原理 二、放射免疫分析常用标记物 三、放射性活度测定方法 四、放射免疫分析仪的应用 第十章 免疫分析相关仪器 随着基础免疫学研究的深入和现代免疫学理论的建立，大量免疫学分析技术被不断地创新、发明，极大地促进了临床免疫学检测项目的推陈出新和检测手段的自动化、智能化和网络化，而基于各种免疫分析技术的仪器也应运而生。本章将主要介绍临床上常用的几种免疫分析仪器。 第一节 酶免疫分析仪 一、分型及特点 （一）酶免疫分析技术的分类 酶免疫分析（enzyme immunoassay，EIA）是目前临床免疫检验最常用的分析技术，具有灵敏度高，特异性强，试剂稳定，操作简单、快速且无放射性污染等优点。其基本原理是将抗原抗体反应的高度特异性与酶的高效催化作用相结合，其中酶作为示踪剂标记抗体（或抗原）并通过分解相应的底物来显色，以对细胞核标本中的抗原（或抗体）进行定位分析和鉴定或根据显色的深浅在微克、甚至纳克水平上对其进行定量测定。 根据抗原抗体反应后是否需要分离结合与游离的酶标记物，可分为均相酶免疫测定和非均相（或异相）酶免疫测定两种方法。 均相酶免疫分析法（homogeneous enzyme immunoassay，HEI）测定对象主要是激素、药物等小分子抗原或半抗原，其测定模式为竞争抑制法，酶标记待测抗原，而试剂中有足够的针对待测抗原的抗体和酶的底物。整个反应都在均匀的液相中进行，待抗原抗体结合反应平衡后，即可直接测定结果，而无需分离结合和游离的酶标记物。均相酶免疫分析主要有酶扩大免疫测定技术和克隆酶供体免疫测定技术两种方法。 非均相酶免疫分析法（heterogeneous enzyme immunoassay）与均相酶免疫分析法最主要的区别是在抗原抗体结合反应达到平衡后，需采用适当的方式将游离的和结合的酶标记物加以分离，再通过底物显色才能测定抗原（或抗体）含量。根据试验中是否使用固相支持物作为吸附免疫试剂的载体，又可分为液相酶免疫法和固相酶免疫法两种，后者称为酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA），是临床上应用最广泛的免疫分析方法。根据检测目的和操作步骤的不同，ELISA有可分为双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、竞争抑制法和IgM抗体捕获法。ELISA是临床上最常用的免疫分析方法，目前常用的酶免疫分析仪都是基于ELISA技术，称为酶免疫分析仪。 （二）酶免疫分析仪的类型 根据固相支持物的不同而设计成的酶免疫分析仪可以分为微孔板固相酶免疫测定仪、管式固相酶免疫测定仪、微粒固相酶免疫测定仪和磁微粒固相酶免疫测定仪等。 1．微孔板固相酶免疫测定仪 微孔板固相酶免疫测定仪简称酶标仪，有多种分类方法。根据通道的多少可分为单通道和多通道2种类型，单通道又有自动和手动2种之分。自动型的仪器有X、Y方向的机械驱动机构，可将微孔板上的小孔一个个依次送入光束下面测试，手动型则靠手工移动微孔板来进行测量。 在单通道酶标仪的基础上又发展了多通道酶标仪，此类酶标仪一般都是自动化型的。它设有多个光束和多个光电检测器，如 12个通道的仪器设有 12条光束或 12个光源，12个检测器和12个放大器，在X方向的机械驱动装置的作用下，样品12个为一排被检测。多通道酶标仪的检测速度快，但其结构较复杂价格也较高。根据波长是否可调可分为滤光片酶标仪（波长固定的滤光片，如：405，450，490，630nm）和连续波长酶标仪（波长连续可调，一般递增量为1nm）。根据功能又可分为带紫外功能的酶标仪和?带荧光功能的酶标仪。 与普通光电比色计相比，酶标仪主要有以下特点：①比色液的容器不是比色皿而是用塑料微孔板，因其对抗原或抗体具有很强的吸附力；②光束是垂直通过微孔板中的待测液；③酶标仪通常使用光密度OD来表示吸光度。 2. 管式固相酶免疫测定仪 应用管式固相载体的ELISA分析仪器不多，在我国应用的有： ① 1990年德国推出的全自动管式ELISA分析系统和配套试剂。试剂包括