唾液淀粉酶最适pH值的测定实验设计.docxVIP

生物化学实验考核设计方案 PAGE 4 唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 小组成员: 刘倍材 何标才 揭春晓 李芮 实验目的： 掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。 掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。 熟悉影响酶促反应速度的因素。 实验原理： 1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。 2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。 实验步骤： 1.缓冲溶液的配制。取12支试管进行编号1-12，分别按下表加入试剂。 编号 1 2 3 4 5 6 PH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 0.2mol/L Na2HPO4(ml) 0.40 0.62 0.93 1.33 1.88 2.45 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 4.60 4.38 4.07 3.67 3.12 2.55 蒸馏水 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 编号 7 8 9 10 11 12 PH 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 0.2mol/L Na2HPO4(ml) 3.05 3.60 4.05 4.35 4.58 4.74 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 1.95 1.40 0.95 0.65 0.42 0.26 蒸馏水 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 2.唾液的采集。 先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉, 让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。 3.唾液的稀释。取10支试管，进行编号1＇-10＇,进行稀释。 编号 1＇ 2＇ 3＇ 4＇ 5＇ 6＇ 7＇ 8＇ 9＇ 10＇ 唾液（ml） 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 蒸馏水 （ml） 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 4.唾液稀释倍数的选取。 另取10支试管，分别编上A-K号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴5分钟后取出，滴加2～3碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。 5.最适PH的测定。 另取12支试管,进行编号,按下表加入试剂。进行测定。 编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0.02％淀粉溶液(ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 3ml缓冲溶液pH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 37摄氏度水浴10分钟 稀释唾液 (ml) 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 37摄氏度水浴2分钟,取出,分别加入2-3滴碘液,以蒸馏水作为对照管,用660nm波长测定吸光度 A660 6.结果分析 当在最适PH下反应时,淀粉被水解最完全,剩余最少,颜色最浅,吸光度最小,所以吸光度最小对应的PH为最适PH。 思考讨论: 1. 2.