TLR5在不同非小细胞肺癌细胞株的表达及其活化机制的初步探讨.pdfVIP

8 · · 中国肺癌杂志2 0 5 年 月第  8 卷第 期 Chin J Lung Cancer, Januar y 20 5, Vol. 8, No.  DOI: 0.3779/j.issn. 009-349.205.0.02 ·基 础 研 究· TLR5在不同非小细胞肺癌细胞株的表达 及其活化机制的初步探讨 周辉 罗媚 文亦戈 马安迪 罗永忠 易青 陈建华 肖玲 Toll 5 toll-like receptor 5, TLR5 【摘要 】背景与目的 已有的研究表明： 样受体 （ ）在肿瘤起始和发展中发挥重 要作用。我们前期研究发现， TLR5在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC ）组织中高表达，但其在 NSCLC高表达后的信号通路活化情况的研究并不多见。本研究旨在探讨TLR5在不同NSCLC细胞株上的表达，及其 在NSCLC细胞中活化的机制。方法 用免疫荧光、RT-PCR和Western blot方法检测TLR5在三种不同NSCLC细胞株中的 表达。分别用0 μg/mL 、0.0  μg/mL 、0.  μg/mL 、 μg/mL、5 μg/mL 、0 μg/mL 的鞭毛蛋白刺激，用NF-κB荧光素酶报 告基 因质粒瞬时转染后，检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性。选择TLR5表达最高的SPC-A- 细胞株为实验对象，选 择0.  μg/mL 的鞭毛蛋白，分别用0 μg/mL 、0.0  μg/mL 、0. μg/mL 、 μg/mL 、0 μg/mL 的TLR5抗体抑制通路活化， NF-κB TLR5 TLR5-shRNA SPC-A-  48 h 0.  μg/mL 检测细胞内 荧光素酶的活性，验证 活化通路。构建 ，转染 细胞 后，以 浓度鞭毛蛋白分别刺激SPC-A-细胞 SPC-A- 0 min 0 min 30 min 60 min Western blot 及转染的 细胞 ，在刺激 、 、 、 ，用 方 法比较TLR5信号通路因子p-IKBα 、p-ERK /2 、p-J NK 、IKBα 、ERK /2 的变化。结果 TLR5在肺腺癌细胞株SPC-A-  中呈高表达，且主要表达在细胞膜上。三种细胞株中SPC-A- 细胞NF-κB荧光素酶的活性最高，呈浓度依赖性，0.  μg/mL NF-κB P 0.05 SPC-A-  NF-κB TLR5 鞭毛蛋白即可明显增强 荧光素酶的活性（ ）；而 细胞 内 荧光素酶的活性可被 TLR5 P 0.05 0 min SPC-A- p-IKBα p-ERK /2 p-JNK 抗体抑制，与