XXXXX项目-温州医科大学附属第一医院.docVIP

“XXXXX”项目 的工作和技术报告 目 录 1、工作总结报告 （1）项目研究思路与技术路线总结 （2）项目的实施情况（包括研究工作内容和过程、研究的工作量、保证质量的措施等） （3）论文、专著目录（包括未发表） （4）工作中存在的问题和建议 2、技术总结报告 （1）项目研究背景及国内外同类技术进展情况 （2）项目合同书规定的研究内容和要求达到的技术经济指标 （3）本项目已完成的研究内容及达到的技术指标（对照合同） （4）对照研究内容逐项总结研究结果（提供详细的材料、方法、实验数据及图表等） （6）项目的创新点 （7）项目取得的社会、经济效益以及推广应用前景 （8）讨论 项目工作总结报告 一、项目研究思路与技术路线总结 慢性粒细胞白血病（CML）和部分急性B淋巴细胞白血病由于BCR-ABL融合基因阳性，BCR-ABL携带的强酪氨酸激酶活性是其发病基础，目前采用酪氨酸激酶抑制剂（TKI）如imitinib等治疗可有效改善病人预后。目前常用的BCR-ABL融合基因或转录本检测方法是G显带FISH法和实时荧光定量PCR法（RQ-PCR），G显带FISH法由于敏感性低仅用于白血病诊断，RQ-PCR法可用于白血病微小残留病灶检测（MRD），但由于不同RNA样本存在不同的逆转录效率，因而RQ-PCR法定量存在一定缺陷。常规细胞遗传学加FISH法虽然能在单个细胞水平上检测有无融合基因存在，但由于受染色体显带质量好坏的影响，且通常只能分析少量分裂象(200～500个)，因此其检测MRD的敏感性低。RQ-PCR法灵敏度高，可达10-5～10-6，反映白血病细胞总体融合基因表达状态。同时，此两种方法均需要专门的技术人员或特定的仪器才能操作，极其耗时。融合基因通过转录翻译出融合蛋白发挥生物学活性，蛋白才是其发挥生物学活性的物质基础，检测融合基因或蛋白均可监控MRD。由于G显带FISH法和RQ-PCR法检测融合基因表达均有一定的缺陷，因而临床还需要一种特异性和敏感性俱佳的方法来检测融合基因或蛋白表达来监控MRD。 流式细胞仪自上个世纪八十年代进入中国以来，目前在三乙医院以上单位均已配备，主要应用于检测细胞膜和细胞内蛋白表达，是检验医学技术的重点发展方向，其中，流式分子表型分析和流式免疫磁珠法是其发展趋势。流式分子表型分析是指流式分子表型分析与免疫表型分析技术相结合，通过PCR或RT-PCR进行引物特异的核酸序列扩增，应用对特定基因的特异性寡核苷酸荧光素标记探针进行荧光原位杂交（FISH），加入针对细胞亚群荧光素标记的单抗，可用流式细胞仪检测分析。另一种流式免疫磁珠法即CBA，其原理是将包被某种抗原或抗体的不同大小的微球与待测液体中的相应成分反应形成抗原与抗体的复合物，再加入荧光素标记的二抗，微球上结合的待测抗原或抗体分子数量与其荧光强度呈线性关系，由此可对待测液体中与微球上包被抗原或抗体分子相对应的成分进行定性或定量分析，其灵敏度极高、能同时测定单个标本中的多种蛋白。 我们设计建立流式分子表型分析（即Flow-FISH）法检测BCR-ABL融合基因和PML-RARa融合基因的方法，CBA法检测BCR-ABL融合蛋白的方法，并将这两种方法与FISH法和RQ-PCR法进行方法学比较，同时应用于临床检测，分析其应用价值。 二、项目实施情况（包括研究工作内容和过程，研究的工作量，保证质量的措施等） 研究工作内容 研究Flow-FISH法检测BCR-ABL融合基因和PML-RARa融合基因方法的可行性和方法学评价。 研究流式免疫磁珠法检测BCR-ABL融合蛋白方法的可行性和方法学评价，将其应用于临床检测中分析在Ph+白血病诊断和治疗监控中的作用及意义。 研究工作过程、工作量 2009.01—2009.12：Flow-FISH法检测BCR-ABL融合基因和PML-RARa融合基因方法建立及临床标本检测。 2010.01—2010.12：流式免疫磁珠法检测BCR-ABL融合蛋白方法建立及临床标本检测。 2011.01—2011.06：数据整理、统计分析、补充检索文献补充实验、发表论文、准备结题、成果鉴定 研究工作保证质量的措施 RQ-PCR技术： RQ-PCR技术是本课题关键实验技术之一，本课题组已配备了多年从事分子生物学技术的人员（硕士研究生毕业）操作、可以确保实验材料来源的充足和可靠，可以保证实验的顺利进行。 细胞培养技术： 细胞培养技术是本课题关键实验技术之一，本课题组已配备了多年从事细胞培养的人员操作、可以确保实验材料来源的充足和可靠，可以保证实验的顺利进行。 原位杂交技术： RQ-PCR技术是本课题关键实验技术之一，本课题组已配备了从事FISH的人员（硕士研究生毕业）操作、可以确保实验材料来源的充足和可靠，可以保证实验的顺利进行。 流式细