生物技术综合实验(二).pptVIP

3．上样： （1）放去床表面上的缓冲液至与凝胶界面平齐。 （2）用进样器吸取酶液0.5ml，加样时将进样器尖端接触柱内壁并在离床表面数毫米处随加随沿内壁转动一周，使样品尽快分布于全表面。然后打开恒流泵，待样品液面与床柱表面平齐时，关闭恒流泵，以少许（0.1—1ml）缓冲液冲洗内壁数次，在打开恒流泵，放至液面与床柱表面平齐。 （3）先用进样器加1cm高度的缓冲液覆盖样品，然后加足缓冲液，连接好进液管。 4．洗脱： 开启部分收集器和恒流泵，以pH7.8, 5mmol/L磷酸缓冲液进行洗脱。调节流速，控制每管收集洗脱液1ml，每管按收集顺序做好标记。 5．洗脱液酶蛋白含量的测定： ： （1）取洁净试管数支，分别加入考马斯亮蓝溶液3ml,摇匀，将其中一支试管不加任何试液作为对照管，其余的分别加入从第五收集管起的洗脱收集液50μl,反复摇匀。 （2）以对照管为调零液，用1cm比色杯在595nm波长下测定各管的OD595nm值。 （3）合并OD595nm值高的原收集液，此即纯化的SOD酶液。保留测酶活力。 （4）测定完毕，先用乙醇洗去比色杯的颜色，再用蒸馏水荡洗，用擦镜纸拭干水珠，倒扣在培养皿内。 （5）清理干净工作台，在仪器使用登记本上登记使用情况。 （三）SOD酶活力测定 　　在一般情况下，SOD活性测定只能应用间接活性测定法。其测定方法很多，常见的有