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FasL基因RNA干扰质粒的构建与鉴定 龚青1, 2徐进文3（通讯作者）徐祖敏2高国全2（1 T州医学院基础学院 牛化教研室510180）（2中山大学中山医学院生化教研室510080）（3广州 中医药大学基础学院牛理教研室510080） 【摘要】目的构建细胞凋亡受体通路相关蛋白FasL表达的RNA干扰（RNAi）质 粒，为研究FasL参与的细胞信号通路提供稳定转染细胞的RNA干扰质粒。方法 选取FasL基因的19nt特异性序列，设计针对FasL的shRNA序列，应用基因重 组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体中,EcoR I和Apa I进行双酶切和DNA 测序鉴定重组克隆，在脂质体的介导下包含FasL基因RNAi的重组载体转染脐 静脉血管内皮细胞，转染48h后，收集细胞裂解Western blotting分析对照组 与转染组FasL蛋白的表达水平。结果 双酶切证实shRNA正确插入pSilencer 1.0-U6质粒QNA测序证实插入的序列正确;FasL基因RNAi的载体转染血管内 皮细胞成功;Western blotting结果显示与空质粒对照组比转染组细胞FasL表达 下调。结论 成功构建人FasL基因RNA质粒，为研究FasL参与的细胞信号通路 提供了稳定的转染细胞载体。 【关键词】载体FasL RNAi 胞外的死亡信号可通过死亡受体转入胞内。死亡通路在免疫