bFGF在实验性糖尿病大鼠结状神经节中的作用及该神经节超微结构的研究.docx

bFGF在实验性糖尿病大鼠结状神经节中的作用及该神经节超微结构的研究 高尚1 丁丽宏2李筱贺1王志强1马界荣1张琪1 (1内蒙古医科大学基础 医学院解剖教研室010051； 2内蒙古医科大学附属医院 010051) 【中图分类号】R587.1【文献标识码】A【文章编号］1672-5085 (2012 ) 50-0206-03 【摘要】目的 探讨bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)在糖尿病神经病变(DNP) 屮的作用，为临床提供糖尿病神经病变的形态学依据。方法 所有大鼠给予链腺 佐菌素(STZ) 60mg/kg腹腔注射，72小时后测尾静脉血糖，血糖ge;16.7mmol/L 且稳定2周以上者纳为糖尿病模型。在电子显微镜下观察结状神经节超微结构, 用免疫组织化学的方法检测bFGF的表达。结果 电子显微镜下发现糖尿病神经 病变时细胞胞质内线粒体肿胀、溶解、悄断裂；高尔基体成熟面肿胀；内质网肿 胀，明显扩张。细胞核内内质网明显扩张，尼氏体边集。糖尿病大鼠较正常对照 组大鼠结状神经节细胞胞浆bFGF表达增强。结论 糖尿病时大鼠结状神经节超 微结构发生变化，胞浆bFGF表达增强，可能是机体的一种抗损伤反应，bFGF对 糖尿病神经病变时的神经元具有修复作用。 【关键词】大鼠 糖尿病神经病变 超微结构 碱性成纤维细胞生长因子 糖尿病(DM)是由于朕岛素分泌不足或膜岛素抵抗所致的一组代谢性 疾病，并发症可影响全身重要器官。糖尿病神经病变(DNP)是糖尿病最常见的 并发症以及是病人致残的主要原因2—，出现时间较早，给病人带来极大的痛苦, 严重影响患者的生活质量和危及生命健康［1］。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF),是一类多功能的多肽生长因子，它与神经系统 的生长发育有十分密切的关系。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)能促进体外培 养大鼠海马、皮层隔、丘脑神经元的存活和突起的生长，以及脊髓神经元(鸡胚) 的存活［2, 3］o在病理情况下细胞因子的异常表达多与系统或器官疾病的产生、 发展密切相关。本实验通过对糖尿病大鼠结状神经节形态结构的观察，检测结状 神经节中bFGF的表达，探讨细胞因子bFGF对糖尿病周围神经系统功能障碍的 发生、发展的影响，为糖尿病周围神经系统功能障碍的发病机制和治疗提供一定 的形态学理论依据。 .材料与方法 1.1实验动物模型及分组 选用雄性健康SD大鼠25只，体重160g-180g,随机分为2组，对照组 10只，模型组15只。将链腺佐菌素溶解于0.1M PH=6.0枸椽酸盐缓冲液，配成 2%新鲜的链腺佐菌素（STZ）溶液，滤菌器除菌，以60mg/kg剂量一次性腹腔注 射。正常对照组用等量生理盐水腹腔注射。选择注射STZ后72小时尾静脉取血 测血糖，血糖ge;16.7mmol/l,尿量以及饮水量明显增多者列入糖尿病实验大鼠 模型，本组有13只造模成功。期间动物统一笼养，喂以基础饲料，自由进水， 不进行胰岛素注射治疗，每两周测体重和血糖。 1.2标本收集及检测方法 饲养8周后所有的大鼠称取体重，均禁食水10小卩寸，尾静脉取血测血 糖。动物处死前5%乌拉坦腹腔注射麻醉（1.0ml/100g体重）。在颈部正中线处, 作4cm切口，借助外科手术显微镜，找出左右侧颈动脉鞘，并仔细分离岀迷走 神经，至颅底颈静脉孔即迷走神经离开颅腔处，立即取左侧结状神经节制备电镜 标本，右侧结状神经节固定于4%多聚甲醛中固定，常规脱水、石蜡包埋、切片， 采用免疫组化染色，观察结状神经节bFGF表达（bFGF试剂盒购于Sigma公司）。细 胞质内见染成棕黄色颗粒的结状神经节细胞，认定为表达阳性细胞。采用 HPIAS-1000高清晰度彩色病理图像分析系统，在400倍视野下每张切片取5个视 野，测定平均灰度值作半定量分析,用以反映其蛋白表达水平。 1.3 ?统计学分析 采用SPSS16.0统计软件进行统计分析所有数据均用-xplusmn;s表示’ 对所测结果进行正态性及方差齐性检验，组间比较采用单因素方差分析。 ?结果 2.1实验组人鼠注射药物后，整体状态差糖尿病人鼠组较正常对照组明 显体重减轻，大鼠出现多尿、多饮、多食症状，行动迟缓，精神萎靡不振、体毛 发黄、稀疏、掉毛，反应迟缓等症状，血糖值与正常对照组比较维持在 （gt;16.7mmol/l）水平（体重及血糖见表1和表2）。 表1对照组与糖尿病组体重（克）值比较 组别0周2周4周6周8周 对照组 179.17plusmn;9.25 226.60plusmn;ll.：L5 282.08plusmn;13.89 340.40plusmn;16.02 422.92plusmn;13.73 糖尿病组 175.50plusmn;：13.43 187.