检测生物组织中还原糖脂肪和蛋白质.doc

检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质 一、实验原理 （1）鉴定实验设计的理念： 某些化学试剂 + 生物组织中有关有机化合物 → 产生特定的颜色反应。 （2）具体原理： ①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。 ②脂肪小颗粒 + 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。 ③蛋白质 + 双缩脲试剂→紫色反应。 二、目标要求 初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 三、实验材料 1.可溶性还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。 2.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好。 3.蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白)。 四、仪器、试剂 1.仪器:双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜。 2.试剂:①斐林试剂(0.1g/L的NaOH溶液+ 0.05g/mL的CuSO4溶液)；②苏丹Ⅲ染液；③双缩脲试剂；④ 体积分数为50%的酒精溶液；⑤蒸馏水。 五、方法步骤 （一）、还原糖的鉴定 1、实验流程：取材→加试剂→加热→观察 2、鉴定步骤: = 1 \* GB3 ①选材： 梨：洗净、去皮、切小块，取5g放入试管中（图1） ②加斐林试剂：2ml（由斐林试剂甲液和乙液充分混合而成，不能分别加入） ③水浴加热：煮沸2min = 4 \* GB3 ④观察溶液颜色变化：浅蓝色→棕色→砖红色。 结论：还原糖与斐林试剂在加热煮沸的过程中生成砖红色沉淀（图2） 图1 图2 3、改进后优点 简化了用榨汁机榨汁这一步，节省了操作时间，以及对榨汁机的清洗等步骤；另外小梨块可以在实验过程中切取，不需提前切好，不易因时间太长而褐化，从而避免对反应现象的干扰，使实验现象更明显。 （二）、脂肪的鉴定 1、实验流程：取材→挤压→加液→观察 2、鉴定步骤: = 1 \* GB3 ①取材：花生种子 ②挤压：在纸上用力按压，显出油斑（图3） ③加液：在油斑上滴2-3滴苏丹Ⅲ染液 = 4 \* GB3 ④观察：油斑出被染成橘黄色（图4） 结论：细胞中的圆形脂肪小颗粒已经被染成橘黄色。 图3 图4 3、实验成功的要点： ①.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好。 ②该实验成功的关键是获得油斑或只含有单层细胞理想薄片。 ③滴苏丹Ⅲ染液染液染色2-3min，不需要用酒精洗去浮色 （三）、蛋白质的鉴定 1、实验流程：选材→加样→加液→观察 2、实验步骤： = 1 \* GB3 ①选材：鸡蛋白或卵清稀释液或黄豆（浸泡1-2d）、豆浆、滤液等， = 2 \* GB3 ②加样：取鸡蛋白切成小块，放入试管中。 = 3 \* GB3 ③加液： 先加入A液(即0.1 g/ml的 NaOH 溶液)，约十分钟， 再加入双缩脲试剂B液(即0.01g/ml的 CuSO4 溶液)。 = 4 \* GB3 ④观察：在NaoH溶液中鸡蛋白逐渐变性成透明的胶状，并开 始溶解，加入双缩脲试剂B液后溶液变成紫色。 图5 图6 结论：蛋白质与双缩脲试剂发生紫色反应。 3、实验成功的要点： ①蛋白质的鉴定实验:用鸡蛋蛋白小块，不会因为蛋清液稀释不够而黏附在试管上，试管易 清洗。 ②双缩脲试剂的使用，一定要先加入A液(即0.1 g/ml的 NaOH 溶液)，再加入双缩脲试剂B液(即0.01 g/ml的 CuSO4 溶液)。 ③还可设计一只加底物的试管，不加双缩脲试剂，进行空白对照，说明颜色反应的引起是蛋白质的存在与双缩脲试剂发生反应，而不是空气的氧化引起。