HGF、CMet与VEGF在子宫癌中表达和其临床意义.docxVIP

HGF.C Met与VEGF在子宫癌中表达和其临 【摘要】目的检测HGF、CMet和VEGF蛋白在子宫 癌中的表达情况，分析三者在子宫癌的发生、发展、转移和 侵袭等方面的作用，为判断子宫癌的预后及基因靶向治疗提 供理论及实验依据。方法选取我校附属医院2009年12月至 2010年8月期间收集的子宫癌手术患者35例，取其癌组织 标本作为研究组；取35例子宫肌瘤患者的组织标本为对照1 组；同时选取35例门诊手术患者中正常子宫组织标本作为 对照2组，对照检测HGF、CMet和VEGF蛋白的表达，比较 它们在子宫癌组织、子宫肌瘤组织和正常组织中的表达情 况。结果HGF在子宫癌中的阳性表达为7143% (20/35),显 著高于子宫肌瘤组857% (3/35)和正常子宫组286% (1/35), P005o结论HGF、CMet和VEGF蛋白在子宫癌中的表达显著 上调，其过度表达可能为子宫癌的促发因素之一，与患者的 预后密切相关。 【关键词】子宫癌；肝细胞生长因子；肝细胞生长因子 受体；血管内皮生长因子 作者单位：276000临沂，山东医学高等专科学校子宫癌 是妇科最常见的恶性肿瘤之一，占妇科肿瘤的10%?20%,据 世界卫生组织估计80年代全世界子宫癌每年新发病例为459 万，而中国则为1315万，约占新发病例总数的1/3。而且， 近年来世界各国资料均显示子宫癌有年轻化和子宫颈腺癌 发病率上升的趋势。肿瘤的发生与发展是近年来国内外研究 的热门课题，尤其是多种因子在肿瘤的发生、发展和血管再 生中的作用日益受到重视。大量研究证实恶性肿瘤的发生、 发展和侵袭、转移涉及到多基因、多因素及多分子水平的过 程，是一系列复杂的级联式反应［1］。国外研究表明，在肿 瘤细胞的侵袭、转移过程中，肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)发挥了非常重要的作用。HGF是由间 质细胞分泌的一种多效性生长因子，其生物活性由单一受体 CMet蛋白所介导，CMet表达于多种上皮细胞上，两者结合 后，在调控组织和血管再生、胚胎发育以及损伤修复等过程 中有重要作用［2, 3］o并且HGF/CMet参与多种细胞因子的 调控，血管内皮生长因子(vascular epithelial growth factor, VEGF)即是其中之一。肿瘤血管生成有多种调控因 子，VEGF是高度特异的促血管内皮细胞有丝分裂素，并且是 目前已知的作用最强的一种促血管生长因子［4］, VEGF表达 水平高低反映了肿瘤血管内皮细胞增殖、迁徙和血管构建的 水平。HGF可通过3磷脂酰肌醇激酶途径诱导VEGF的表达和 分泌，从而促进肿瘤血管的形成［5］。目前国内外尚无HGF、 CMet、VEGF和子宫癌关系的研究和报道，为了解HGF、CMet 和VEGF与子宫癌发生、发展及预后的关系，本研究采用免 疫组织化学方法（PV二步法）检测HGF、CMet和VEGF蛋白 在子宫癌中的表达情况并探讨其临床意义。 1资料与方法 11临床资料收集35例我校附属医院2009年12月至 2010年8月期间收治的子宫癌患者行根治性手术后所留取的 标本，所有患者术前6个月内均未使用过激素治疗，未经化 疗和放射治疗，也无其他严重的内外科疾病。均经病理检查 确诊，有详细的病理资料和临床记录。每一例组织离体后迅 速用生理盐水冲洗掉血迹，用无菌手术刀在肿瘤中心部位切 取癌组织，经复习HE切片，再次光镜诊断后，用10%多聚甲 醛固定，常规脱水、透明、石蜡包埋，5 pm厚切片。另取 35例同时间内收治的子宫肌瘤患者的组织标本为对照1组， 35例门诊手术患者中正常子宫内膜组织标本为对照2组，同 样制备石蜡切片，收起备用。 12方法 121主要试剂兔抗人HGF多克隆抗体（工作浓度 1 : 200）、兔抗人CMet多克隆抗体（工作浓度1 : 300）、兔 抗人VEGF多克隆抗体（工作浓度1 : 200）、免疫组织化学 （PV9000二步法）山羊抗兔二抗试剂盒和DAB显色试剂盒均 购于北京中杉金桥生物技术有限公司。 122检测方法采用免疫组织化学PV9000二步法。切片常 规脱蜡，梯度水化，PBS （pH74）冲洗3minX3次，001 mol/L 柠檬酸缓冲液微波炉加热修复抗原，PBS冲洗3 minX3次， 3%过氧化氢去离子水室温孵育10 min,以阻断内源性过氧化 物酶活性，PBS冲洗3 minX3次，分别滴加HGF、CMet和 VEGF 一抗工作液，放入湿盒，冰箱孵育过夜，次日取出 室温放置30 min, PBS冲洗3 minX3次，滴加二抗，室温 孵育20 min, PBS冲洗3minX3次，DAB染色，苏木素复染, 返蓝，中性树胶封片。所有染色均在相同条件下进行，各组 均留取一张切片作HE染色。用已