大鼠肝细胞球形体低温保存条件的初步探索.pdfVIP

　 军 杂 2014年12月1 日　第39卷　第12期 936 解放 医学 志　 论　著 大鼠肝细胞球形体低温保存条件的初步探索 刘鸿凌，游绍莉，李晨，刘婉姝，万志红，臧红，朱冰，荣义辉，柳芳芳，Scott L.Nyberg，辛绍杰 [摘要]　目的　探索有效的肝细胞球形体低温保存方法，促进生物人工肝及其他研究的应用。方法　采用两步 法分离大鼠肝细胞，经无血清培养基(SFM)摇摆培养48h形成肝细胞球形体。将球形体继续培养(对照组) ，或置于4 ℃ SFM ，SFM+1mmol/L去铁胺(Def ) ，SFM+1µmol/L环孢霉素A(CsA) ，SFM+1mmol/L Def+1µmol/L CsA保存液中24h或 48h ，继续培养4d或5d后观察低温保存后肝细胞球形体的存活率、超微结构变化，以及白蛋白和尿素合成情况。结果 　Def和CsA能很好地保护球形体肝细胞，在4 ℃ SFM+Def+CsA保存液中保存24h ，肝细胞球形体功能、结构等变化及 尿素合成水平与对照组比较差异无统计学意义，而单独放在SFM 中进行低温保存后，细胞活性明显下降。在4 ℃保存 48h后，球形体肝细胞超微结构发生明显变化，死亡细胞增多，但SFM+Def+CsA组和SFM+Def组细胞结构优于SFM组和 SFM+CsA组，细胞存活率及尿素合成水平明显高于后两组(P 0.05) ，但合成白蛋白量均处于较低水平，各组间差异无 统计学意义(P 0.05)。结论　低温状态下肝细胞球形体可保持良好的存活率和功能24h ，低温保存能为细胞治疗提供良 好的细胞材料。 [关键词]　肝细胞；低温保存；球形体，细胞；肝，人工 [中图分类号]　R329-33　　　　[文献标志码]　A　　　　[文章编号]　0577-7402(2014)12-0936-05 [DOI]　10.11855/j.issn.0577-7402.2014.12.02 Primary exploration of conditions for hypothermic preservation of rat hepatocyte spheroids 1 1 1 1 1 1 1 1 LIU Hong-ling , YOU Shao-li , LI Chen , LIU Wan-shu , WAN Zhi-hong , ZANG Hong , ZHU Bing , RONG Yi-hui , 1 2 1* LIU Fang-fang , Scott L. Nyberg , XIN Shao-jie 1Liver Failure Diagnosis and Treatment Center, 302 Hospital of PLA, Beijing 100039, China 2Division of Experimental Surgery, M ayo Clinic College of Medicine, R ochester, MN 55905, USA * Corresponding author, E-mail: xinshaojie302@163.com This work was supported by the Twelfth Five-Year Plan National Science and Technology M ajor Project f or Infectious Diseases of China (2012Z005) [Abstract]　Objective　To optimize conditions for hypothermic preservation of rat hepatocyte spheroids without freezing in order to facilitate the application of biological artificial liver. Methods　Rat hepatic cells were isola