第一章植物组织培养实验室的构建和操作技术.pptVIP

植物组织培养;第一节 实验室及主要设备 ;主要内容;组织培养实验室布局的总体要求;　实验室设计原则：保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。 实验室的大小应取决于工作的目的和规模 按组织培养流程来设计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱 利用一定的设备、器材和特殊的实验室结构设计，达到严格无菌的条件;一、实验室设置及仪器设备;辅助实验室;基本实验室布局平面图;A Glimpse of Plant Tissue Culture;（1）准备室;组织培养准备实验室; 1）洗涤间; 面积60平方米左右，配备的主要仪器设备有 ：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积180-200L为宜，用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。天平应有不同感量。; 配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。 如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。;（2）缓冲室（注意门的朝向）;;无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。 ;无菌室（一）;无菌室（二）;; 为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，???应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。 培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W，固定在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距离在20cm，光照强度为2000-3000lx。;培养室; 植物组织培养材料移到田间前，通常先移到温室进行练苗，待生根成活后，再移到大田。;2．辅助实验室;为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。;二、仪器和设备;2.灭菌锅;医用手提式灭菌锅 ;不锈钢立式灭菌锅;3.超净工作台;（二）药品贮存和配制仪器设备;2.天平;3.酸度计;（三）观察分析仪器设备;（四）培养设备;3.定时器;5.摇床和旋转床 进行液体培养时用以改善气体状况;小型臭氧发生器;不锈钢蒸馏水器（单蒸水）;三、玻璃器皿及用具;（二）器械类;1.洗涤液的配制;A、新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用0.5％的去污剂洗刷，再用自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液中过夜（不可少于四小时），再用自来水冲洗，最后用无离子水冲洗两次，在100℃～120℃烘箱内烘干备用。; 先用自来水洗刷至无污物，再用合适的毛刷沾去污剂（粉）洗刷，或浸泡在0.5％的清洗剂中超声清洗（比色皿决不可超声），然后用自来水彻底洗净去污剂，用无离子水洗两次，烘干备用（计量仪器不可烘干）。清洗后器皿内外不可挂有水珠，否则重洗，若重洗后仍挂有水珠，则需用洗液浸泡数小时后（或用去污粉擦洗），重新清洗。; 聚乙烯、聚丙烯等制成的塑料器皿，在生物化学实验中已用的越来越多。第一次使用塑料器皿时，可先用8mol/L尿素（用浓盐酸调pH = 1）清洗，接着依次用无离子水、1 mol/L KOH和无离子水清洗，然后用10—3 mol/L EDTA 除去金属离子的污染，最后用无离子水彻底清洗，以后每次使用时，可只用0.5％的去污剂清洗，然后用自来水和无离子水洗净即可。;金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤（新的可以用热洗衣粉水洗净），需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。 E、除菌过滤器用清水冲洗后，用洗液冲洗，再用清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗，晾干备用。;1.灭菌工作是极其重要的。 首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴：有菌：凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。