细菌的生长和遗传变异.ppt

第五章 微生物的生长繁殖与生存因子 第一节 微生物的生长繁殖 微生物在适宜的环境条件下，不断吸收营养物质，进行新陈代谢。如果同化作用大于异化作用，则表现为微生物个体生长，到一定阶段开始分裂，微生物个体数量增多，表现为群体生长。 微生物生长通常是指群体的增长。 一、微生物生长量测定方法 （一）测定微生物总数 直接测定是常用的微生物生长测定方法，它借助显微镜直接观察计数，其优点是测定过程快速，缺点是不能区分微生物的死活。 计数器直接计数 电子计数器计数 染色涂片计数 比浊法 1．计数器测定法 3.涂片染色法 将已知体积(0.01ml)的待测样品，均匀地涂布在载玻片的已知面积内(1cm2)，经固定染色后，在显微镜下选择若干个视野计算细胞数量，每个视野的直径和面积、对应的微生物体积用目镜测微尺测出，结合视野中的微生物数量从而推算0.01ml样品的微生物数量。 涂片染色法 4．比浊计数法 测定悬浮细胞的快速方法。 其原理是：单细胞微生物的悬液与浊度成正比，与光密度（OD）成反比。可用分光光度计测定细菌悬液的光密度或透光度；也可以用浊度计测菌悬液的浊度。将未知细胞数的菌悬液和已知细胞数的菌悬液相比，可求出未知菌悬液所含的细胞数。 （1）制标准曲线 （2）测定菌液浊度，查表得出细菌数量 （二）测定活细菌数 间接计数法又称活菌计数法，通过测定样品中活细菌数量来间接地表示细菌含量。优点是只计数样品中的活细菌数目，缺点是测定所需时间较长，手续繁琐。 1.平板计数法 将待测细菌样品先作10倍梯度稀释，然后取相应稀释度的样品涂布于固体平板培养基上，或与未经融化的固体培养基混合、摇匀，培养一定时间后观察并计数生长的菌数，最终根据细菌数和取样量计算出细菌浓度。 一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。 细菌数量=数出的菌落数/稀释度 例如：10-5稀释度时菌落数为100个，则细菌数量=100/10-5=107个/mL 平板计数法是采用最广的一种活菌计数法。 2.稀释培养计数（MPN法） 测定硫酸盐还原菌的数量 用于硝化细菌、产甲烷菌、铁细菌和硫酸盐还原菌计数 硫酸盐还原菌是严格厌氧菌，代谢过程形成硫化氢，硫化氢与铁生成黑色硫化亚铁沉淀，在显微镜下这些沉淀很难与细菌区分；由于它是厌氧菌，不能在空气状态下生长，因此平板培养计数也无法使用，对这类菌可利用其生长时产生的硫化亚铁黑色特征进行液体培养，按MPN法进行计数。 (3)统计、查表、计算 ①统计确定数量指标 取生长管数最多且稀释度最高管中生长的管数，为数量指标的第一位数字，后面两个稀释度的生长管数为后两位数，就上例情况而言，3个重复生长的10-3和10-4两个稀释度，但两者中高稀释度的是10-4，其生长管数“3”为数量指标的第一位数字；第二和第三位数则为2和0。因此所得的数量指标为“320”。 ②查表 所查的统计表是通过其他精确的计数方法，确定的各种数量指标时细菌数量可能的最大值，在确定了数量指标后，可从MPN三管法统计表查相应的细菌最大可能数量。 MPN三管法测数统计表 3. 过滤计数法 (三)计算生长量 细菌细胞尽管很微小，但是仍然具有一定的体积和重量，在细菌生长过程中，测定单位体积液体中细菌群体重量变化直接表示细菌生长数量的方法称为重量法。 1.测定细胞干重法 测定干重时，先将细菌分离，再烘干称量。分离可采用离心法或过滤法。取已经培养一段时间的待测样品，用离心机收集生长后的细菌细胞，或用滤纸、滤膜过滤截取生长后的细菌细胞，然后在105~110℃下进行干燥，称取干燥后重量，以此代表细菌生长量。 水处理工程设施中的细菌生长量通常采用这种细胞干重测定法。这种方法实际上测得的是水中悬浮物重量，如果水中非细菌类的悬浮物很多的话，势必会严重干扰细菌计数的结果。 2.细胞含N量法 大多数生物蛋白质氮含量较稳定，一般为蛋白质干重15％~16％，平均为16％。 水样中菌体蛋白质-N含量、单个细菌中蛋白质含量 (10-15~10-11) g/细胞×(10～18％) 细菌的数目=菌体蛋白质-N ÷16% ÷单个细胞的蛋白质含量 凯氏定氮法 Kjeldahl determination 定义：测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。 3.DNA含量法 同种细菌的DNA含量一致，可通过测定DNA的含量来表示细菌的生长量。 提问：当你需要测定某水样中细菌数量时，你该如何选择方法？ 二、研究微生物生长的方法 微生物群体作为研究对象