体外抗菌实验.pptVIP

第一节 无菌检查 一、无菌检查的概念及应用范围 （一）概念 p333 （二）无菌检查的基本原则 采用严格的无菌操作方法，将被检查的药品取一定量分别接种于适合各种微生物生长的不同培养基中（通常为需氧菌培养基、厌氧菌培养基和真菌培养基），置适宜温度下培养一定时间后，观察有无微生物生长，以判断被检药品是否合格。由于无菌检查是用部分样本的结果推断整体的含菌情况，故被检药品的取样及程序必须按照国家药典的规定进行。 (三）应用范围 1 各种注射制剂 2 眼用及外伤用制剂 3植入剂 4 可吸收的止血剂 5 外科用敷料及器材 然后分别按不同的需要条件培养一定时间,如需氧菌、厌氧菌在30—35℃培养5天,真菌在20—25℃培养7天.观察结果时,阳性对照必须长菌,才能判定供试品是否合格;若阳性对照管不长菌,说明该药物可能有抗菌作用或是油剂等特殊制剂,还应考虑实验条件的合用性. 二 常用微生物限度检查方法 目前对口服药及外用药物的微生物学检验主要是微生物限度检验，即: (1)染菌量检查:包括细菌总数、霉菌总数测定。 (2)控制菌检查：大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等。 方法： 取一定量的供试品药物以无菌生理盐水按比例进行系列稀释，加入定量的稀释液于无菌平皿中，再加入一定量的已熔化的、温度在55 ℃左右的琼脂培养基混匀，凝固后于37 ℃培养24—48h,计数平板内菌落数。一般取菌落数在30—300之间的平板进行计数，然后乘以稀释倍数即可得每毫克或每毫升供试药物中的活菌数。 金黄色葡萄球菌的培养及生化特征 菌落特征 生化试验  第十二章 药物的微生物污染与控制 第一节 药物微生物污染源 一 生产环境 1 厂房 2 设备 3空气 二 生产原料 1 中草药 2 动物性药 三、制药用水 四、生产人员 第二节 微生物引发的药物变质 一、药物的物理性状改变 二、药物的化学成分变化 三、药物变质引发的不良后果 第三节 防止药物微生物污染的措施 一、无菌技术应用 二、环境的无菌化 1 空气洁净技术要求 2 空气洁净常用技术 三、原辅料的无菌处理 1 原辅料 2 制药用水 3 包装材料的灭菌 四、生产人员的无菌操作 1 一般生产区 2 洁净区 五、中药原料与中成药的灭菌 六、中药原料与中成药的存储与养护 （一）影响存储的因素 （二）养护措施 菌种的选育与保藏 (一)菌种选育 1 自然选育: 不经过人工诱变处理,利用菌种的自发突变而进行菌种的选育。 e.g. BCG 2 诱变育种：利用各种诱变剂处理以提高基因的随即突变几率。 诱变育种的三个环节： （1）出发菌株的准备：纯种、产量稳定、特性稳定、对诱变剂敏感等 （2）突变的诱发： ①物理诱变剂：电离辐射（X射线、γ射线等）、紫外线等。 ②化学诱变剂：烷化剂、嵌合剂、碱基类似物等。 ③生物诱变剂：噬菌体 （3）突变株的筛选： 筛选方法：随机筛选 理性化筛选 （四）突变基因的表达：研究最佳发酵条件 3 杂交育种（selection by crossing) 选用已知性状的供体菌和受体菌株作为亲本，通过接合或原生质融合使遗传物质重新组合，再从中分离和筛选出具有新性状的菌株。 （1）准性生殖(parasexual reproduction): 是真菌的一种导致基因重组的过程，有别于有性生殖。（重组体细胞和一般的营养体细胞没有不同，而且并不产生在特殊的囊器中；染色体交换和染色体减少是不规则的而且不协调的）。准性生殖过程包括异核体的形成、二倍体的形成以及体细胞交换和单元化。准性生殖过程中可出现很多新的基因组合。 异核体（heterocaryon）：如使一种类型细胞与另一种类型细胞融合，则可以形成一个同时含有二种以上基因型不同的核，但有一个共同的细胞质的细胞，这种细胞称为异核体。 （2）原生质体融合 4 基因工程技术改良菌种 （二）富集培养与菌种筛选 利用不同微生物间生命活动的特点，制定特定的环境使适应于该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，便于人们从初筛菌种中分离到所需的特定微生物。 e.g. 营养缺陷型（auxotroph)菌株：营养缺陷型是指某菌株经突变后,丧失了合成某营养素(如氨基酸、维生素、核苷酸等)的功能,若在培养基上培养必须添加相应的营养素才能生长。 原养型 营养缺陷型 营养缺陷型菌株的用