生物制药工艺学第7章凝胶层析08-3-25.pptVIP

第七章 凝胶层析(Gel chromatography) 分子筛层析 (molecular sieve chromatography) 凝胶过滤 (Gel filtration) 排阻层析 (exclusion chromatography) 将样品混合物通过一定孔径的凝胶固定相，由于各组分流经体积的差异，使不同分子量的组分得以分离的层析方法。 洗脱曲线 第一节 凝胶层析原理 凝胶层析的分离过程是在装有多孔物质填料的柱中进行的。 柱的总体积为Vt，它包括填料的骨架体积Vg，填料的孔体积Vi(内水体积)以及填料颗粒之间的体积V0（外水体积）。 Vt= Vi +V0+Vg 一、原理 当具有一定分子量分布的高聚物溶液从柱中通过时，较小的分子在柱中停留时间比大分子停留的时间要长，样品各组分即按分子大小顺序而分开，最先淋出的是最大的分子。 Ve=V0+Vi Kd flash 二、凝胶层析的几种理论 （一）平衡排除理论 （二）扩散分离理论 （三）流动分离理论 （一）平衡排除理论 当溶质层流过一个填料颗粒这段距离时，溶质分子已多次进出于填料的孔，达到平衡。 平衡条件是在流速很慢时的一个极端情况。 （二）扩散分离理论 溶质分子在流经凝胶柱的过程中，在流动相和固定相之间没有达到平衡，存在着流速依赖性。 （三）流动分离理论 红细胞在毛血