环境工程微生物学试验.ppt

实验器材 1．试管(15×150毫米)4支、试管架1个、培养皿(90毫米)3套、接种环。 2．肉膏胨淀粉琼脂培养基l瓶(约50毫升)。 3．革兰氏碘液1小瓶(滴瓶)、3％～10％过氧化氢1小瓶(滴瓶)。 4．大肠杆菌培养液和活性污泥混合液。 实验步骤  1．将肉膏胨淀粉琼脂培养基加热融化，待冷至45℃左右倒入无菌培养皿内(每皿约10～ 15毫升)，共倒3个，静置待冷凝即成平板。 2．在无菌操作条件下，用接种环分别挑取大肠杆菌和活性污泥各一环分别在4个平板上各点种4个点。倒置于37℃恒温箱内培养24～48h。 3．观察结果，取出平板，分别在2个平板内菌落周围滴加碘液，观察菌落周围颜色的变化。若在菌落周围有一个无色的透明圈，说明该细菌产生淀粉酶并扩散到基质中去。若菌落周围仍为蓝色，说明该细菌不产生淀粉酶。 4、用滴管吸取过氧化氢滴加到另外2个平板所生长的菌落上，有气泡产生的为接触酶阳性(有过氧化氢酶)，无气泡产生的为接触酶阴性(无过氧化氢酶)。 实验作业 记录实验结果，并进行分析。 实验六 空气中微生物的检测 实验目的 1．了解不同环境条件下，空气中微生物的分布状况； 2. 学习并掌握检测和计数空气微生物的基本方法。 灭菌培养皿、天平、称量纸、恒温箱、培养基 实验器材 (一) 肉汤蛋白胨琼脂培养基（培养细菌） 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g、 NaCl 5.0g、 琼脂 20.0g、 自来水 1000mL、 pH 7.2~7.4 灭菌条件: 0.103Mpa（121℃、15~20min） （二）查氏培养基（培养霉菌） 蔗糖 30g K2HPO4 1g KCl 0.5g NaNO4 2g MgSO4·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 水 1000mL pH 自然 灭菌条件：0.072Mpa（115℃，15~20min） 落菌法 （1）将肉汤蛋白胨琼脂培养基、查氏琼脂培养基溶化后，各倒五个平板，冷凝。 （2）在一定面积的空间内，选择5点，每种培养基每个点放一个平板，打开皿盖，暴露于空气中10分钟后盖上盖子。 （3）肉膏蛋白胨平板于37℃，倒置培养1天；查氏琼脂平板倒置于28℃培养分别培养24~48h各自计算其菌落数，观察菌落形态、颜色。 实验步骤 X X X X X 测定空气微生物的5点采样法 （4）计算每m3空气中微生物的数量。 奥梅梁斯基曾建议：面积为100cm2的平板培养基，暴露在空气中5分钟相当于10升空气中的细菌数。 奥氏公式： 5 t 100 A 1000 10 × N × × C = 式中：C—空气细菌数； A——捕集面积，cm2 ； t ——暴露时间，min； N——菌落数，个。 实验作业 记录观察到的结果，把它填入下面表格中，分析不同环境中微生物的种类和数量存在差异的原因。 实验七 水中细菌菌落总数（CFU）的测定 实验目的 1．学习并掌握饮用水质和水源水质的细菌学检测方法。 2．了解细菌总数与水质的关系。 实验原理 所谓细菌总数（简写为CFU）是指将1ml水样放在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中，于37℃培养24h后，所长出的细菌菌落总数。细菌总数越多，表示水体受有机物或粪便污染越严重，携带病原菌的可能性也越大。 实验器材 1．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。 2．仪器：电炉、恒温水浴锅．恒温培养箱．放大镜。 3．试剂：硫代硫酸钠溶液。 4．其他用品：无菌采样瓶，9ml无菌水试管，无菌培养皿(直径9cm)，无菌移液管等。 实验步骤 1．水样采取 2．细菌总数测定 (1) 水样稀释：根据水样受有机物或粪便污染的程度，可用无菌移液管作10倍系列稀释，获得l:10，1:100，1:1000等系列稀释液。 (2) 混菌法接种；按照无菌操作的要求，用无菌移液管吸取3个适宜浓度的稀释液1ml（或0.5ml），注入无菌培