第九章骨内科学.pptVIP

四、骨关节疾病的感染性指标 （一）化脓性细菌感染 常见的分为急、慢性骨髓炎和化脓性关节炎，主要致病菌为金黄色葡萄球菌。 骨髓炎 化脓性关节炎 长管状骨，如股骨、胫骨、肱骨等 承重关节，如髋关节、膝关节等 临床症状： ①全身：发病急，高热（39-40℃）和中毒症状（寒战、恶心呕吐、食欲不振）； ②局部：患肢疼痛、肿胀、压痛和活动受限 。 实验室检查： ①血常规：中性粒细胞增高； ②关节腔穿刺：关节液混浊，中性粒细胞增高，可做细菌培养，选用敏感抗生素。 （二）骨关节结核感染 好发于椎体、干骺端，多数肺部有原发病灶。 实验室检查：分泌物涂片检查，可见抗酸杆菌。结核菌素PPT试验，局部出现红肿硬节的阳性反应 。 五、分子生物学诊断技术 分子生物学的主要研究对象为核酸和蛋白质。主要运用PCR、蛋白质组学、Westerblot、免疫组化等技术来检测DNA、RNA、蛋白质的表达，从分子水平来研究疾病的病因、发病机制，起到诊断及治疗作用。 PCR技术——聚合酶链式反应（英文全称：Polymerase Chain Reaction），聚合酶链式反应。 用于检测目的基因的表达。 DNA链的延伸 在DNA酶的催化下 四种dNTP 需要有引物 反应：从引物3’-OH，沿5’→3’方向逐步延伸 T A G T C 3′ ATCAGGATCTTTG 5′ 5′ C 3′ 反应步骤示意图 引物 5? 引物 5? 5? 3? 3? 5? 3? 3? 模板 3? 5? 5? 3? 反 应 步 骤 2 退火（annealing） 3 延伸（extension） 引物为起点的DNA的链延伸反应 引物 + 互补模板 降 温 杂交链 1 变性（denaturation） 高 温 氢键断裂 双链解离 模板 PCR的基本原理 高温变性 (92-96℃) 30??-1? 中温延伸 (70-72℃) 30??-2? 低温复性 (40-60℃) 30??-1? 25-30个循环 电泳图 实验原理 　RNA的多聚酶反应（RT-PCR）是以mRNA 为模板进行逆转录反应（reverse transcription， RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤： 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA，加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引物退火，并由DNA聚合酶催化引物延伸生成双链靶DNA， 最后扩增靶DNA. mRNA cDNA PCR产物 需要了解的几个名词 1.基因多态性 2.DNA芯片技术 3.蛋白质组学 4.免疫组化 * * 无菌操作 及时送检 离心除细胞(2～4℃)保存数天 补体或酶－70℃ 晶体检查、革兰染色及培养 * * * 主要的骨代谢指标 （一）骨矿成分检测 （二）骨形成指标检测 （三）骨吸收指标检测 （四）骨代谢调节激素检测 （一）血、尿骨矿成分的检测 1.血清总钙 血清钙主要有2种形式：一为离子钙，二为结合钙。正常血清钙浓度稳定，受甲状旁腺素（PTH）调节。 （1）血钙升高：甲状旁腺亢进、VitD过多、多发性骨髓瘤等 （2）血钙降低：佝偻病、软骨病、甲状旁腺功能减退、 VitD缺乏。 2.血清无机磷 主要以磷酸钙的形式沉积在骨骼中，受PTH调节 （1）血磷升高：生长激素分泌增加如巨人症、肢端肥大症。甲状旁腺功能低下、VitD过多、多发性骨髓瘤等 （2）血磷降低：甲状旁腺功能亢进、佝偻病、软骨病、 VitD缺乏。 3.血清镁 是多种酶的激活剂，影响神经和肌肉功能。高镁阻滞神经肌肉传导，低镁导致神经肌肉兴奋性增高 （1）血镁升高：关节炎、多发性骨髓瘤 （2）血镁降低：营养不良、急性胰腺炎等 4.尿钙、磷、镁 受饮食、药物等因素影响较大，较少使用 （二）常用的骨形成监测指标 1.碱性磷酸酶（ALP）和骨碱性磷酸酶（BALP） ALP由骨、肝、肠、肾、胎盘等同功酶组成，骨型占50%，余者主要来自肝脏。 BALP由成骨细胞分泌，形成磷酸与钙盐沉积于骨骼，是成骨细胞成熟和具有活性的标志。 BALP升高见于骨更新率高的疾病，如甲旁亢、畸形性骨炎、佝偻病、骨折等 2.骨钙素（BGP） BGP是骨骼中含量最高的非胶原蛋白，由成骨细胞分泌，受活性D3调节。 BGP 升高见于长期使用糖皮质激素及骨更新率高的疾病。 3.I型胶原羧基端前肽（PICP） PICP 是成骨细胞合成I型胶原的中间产物，反应成骨细胞的功能状态。 PICP升高见于骨更新率高的疾病。 （三）常用的骨吸收监测指标 1.羟脯氨酸（HOP） HOP是人体结蒂组织中胶原蛋白的主要成分，尿中的HOP50%来源于骨组织。 24h尿HOP 和空腹尿HOP 。