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紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量 【摘要】本实验利用紫外分光光度法测定由维生素C和维生素E组成的混合物中各组分的浓度。在这两种组分组成的混合物中，彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，根据相互间光谱的重叠的程度采用相对的方法进行定量测定。 【关键词】紫外分光光度法；维生素C；维生素E；浓度 引言 维生素C（抗坏血酸）和维生素E(α-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。两者结合在一起比单独使用的效果更佳，因为它们在抗氧化性能方面是“协同的”。因此，它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。维生素C是水溶性的，维生素E是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶液中，能够利用紫外可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外光区测定它们。 2、实验原理 根据朗伯—比尔定律，用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中，若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质，可根据相互间光谱重叠的程度，采用相对的方法来进行定量测定。例如，当两组分吸收峰部分重叠时，选择适当的波长，仍可按测定单一组分的方法处理；但当两组分吸收峰大部分重叠时，则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。 混合组分中在λ1处的吸收等于组分A和组分B分别在λ1处的吸光度之和Aλ A 同理，混合组分在λ2处吸光度之和Aλ A 若先用A、B组分的标样，分别测的A、B两组分在λ1和λ2处的摩尔吸收系数κλ1A、κλ2A、κλ1B、κ A A 即可求得A、B两组分各自的浓度cA和c c c 一般来说，为了提高检测的灵敏度，λ1和λ2宜分别选择在A、B两组分最大吸收峰处或其附近。 3、紫外分光光度法测定维生素C和维生素E含量 3.1、仪器试剂 仪器：紫外-可见分光光度计（天津港东UV-4501S），石英吸收池一对 试剂：维生素C（抗坏血酸），维生素E(α-生育酚)，无水乙醇 3.2、实验步骤 3.2.1、 检查仪器 开机预热20min，并调试至正常工作状态。 3.2.2、 配制系列标准溶液 （1）配制维生素C系列标准溶液：称取0.0132g维生素C，溶于无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为7.50×10-5mol/L。分别吸取上述溶液4.00 mL，6.00 mL，8.00 mL，10.00 mL （2）配制维生素E系列标准溶液：称取维生素E0.0488g，溶于无水乙醇中，定量转移入1000 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为1.13×10-4mol/L. 分别吸取上述溶液4.00 mL，6.00 mL，8.00 mL，10.00 mL于4只洁净干燥的50mL容量瓶中， 3.2.3、 绘制吸收光谱曲线 以无水乙醇为参比，在220～320 nm范围测定维生素C和维生素E的吸收光谱曲线，确定维生素C和维生素E的最大吸收波长λmaxVc和λmaxVe，分别作为λ1 3.2.4、 绘制标准曲线 （1）维生素C标准曲线：以无水乙醇为参比，分别在波长λ1和λ2处测定 （2）维生素E标准曲线：以无水乙醇为参比，分别在波长λ1和λ2处测定 3.2.5.、 未知液的测定 取未知液5.00 mL于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀至标线，摇匀.在波长λ1和λ 3.2.6、 结束工作 （1）实验完毕，关闭电源。取出吸收池，清洗晾干后入盒保存。 （2）清理工作台，罩上仪器防尘罩，填写仪器使用记录。 4、实验数据处理 4.1、λ1、λ 红色曲线——维生素C光度吸收曲线 黑色曲线——维生素E光度吸收曲线 由仪器作图分析直接可得λ1=273.1nm，λ2 4.2、Vc与Ve在λ1、λ Vc/Ve（mL） Vc1=8 Vc2=12 Vc3=16 Vc4=20 Ve1=8 Ve2=12 Ve3=16 Ve4=20 未知 λ1 0.059 0.0628 0.0679 0.0721 0.0608 0.063 0.0668 0.0682 0.068 λ2= 0.0403 0.0419 0.0425 0.0438 0.0574 0.0649 0.0752 0.0816 0.0724 4.3、Vc与Ve的标准曲线图 Vc在λ1处的线性回归方程为：y=1480x+0.04991， κλ1Vc=1480. Vc在λ2处的线性回归方程为：y=370x+0.03824，κλ2Vc=370 Ve在λ1处的线性回归方程为：y=575.22124x+0.0556，κλ1Ve=575.22124. Ve在λ2处的线性回归方程为：y=1834.070x+0.04076， κ 4.4、Vc、Ve的浓度 Aλ1A+B=0。068 κλ1Vc=1480 κλ2 代入下式有