HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片的含量.docVIP

PAGE PAGE 1 HPLC法测定片剂中双氢青蒿素的不确定度 朱 凯通信作者：范 琦，联系电话：023E-mail：fanqi787@，范 琦1*，张小松2， 通信作者：范 琦，联系电话：023E-mail：fanqi787@ （1. 重庆医科大学，重庆 400016；2. 重庆市药品检验所，重庆 401121） 摘 要： 目的：分析HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素含量的不确定度构成及其大小。方法：对不确定度分量进行分析和评定，计算合成不确定度和扩展不确定度。结果：扩展不确定度U = 0.8mg (k = 2)。结论：HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素含量的不确定度主要来源于供试品溶液色谱峰面积的不确定度分量。 关键词：测量不确定度；高效液相色谱法；双氢青蒿素哌喹片；双氢青蒿素含量 中图法分类号：R927.2 不确定度是测量的重要质量特性之一[1-2]。在分析测量中，不确定度评价正在成为一种常规要求[3]。双氢青蒿素哌喹片为双氢青蒿素和磷酸哌喹组成的复方片剂，是一种治疗疟疾的优良药物[4-5]。双氢青蒿素及磷酸哌喹均为中国药典（2005年版）收载[6-7]。采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的含量，结果准确，操作简便[8]，但未见其测量不确定度的相关报道。本文对HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素含量的不确定度构成进行分析，计算不确定度的大小，为评价HPLC法测定片剂含量的结果、提高测定质量提供科学依据和参考。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 Shimadzu LC-2010A高效液相色谱仪（包括自动进样器），SPD-M10Avp二极管阵列检测器，CLASS-VP(v.6.2) 色谱工作站；Mettler AE240电子分析天平 双氢青蒿素哌喹片（重庆华立控股股份有限公司，每片含双氢青蒿素40mg、磷酸哌喹0.32g，批，双氢青蒿素对照品（中国药品生物制品检定所，含量100.0%，批号100184-200401），乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。 1.2 实验方法 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为Phenomenex C18 (250mm × 4.6mm, 5μm)，流动相为乙腈-甲醇-0.02mol·L-1硫酸铵（50:10:40，稀硫酸调pH4.8），流速1.0ml·min-1，检测波长210nm，柱温30℃，进样量10μl。理论板数按双氢青蒿素α异构体峰或β异构体峰计算均不低于10000 测定法 取双氢青蒿素哌喹片10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于双氢青蒿素20mg），置25ml量瓶中是直接称入量瓶中吗，还是称量后直接转入量瓶中，此处作者表述欠清楚，因为此过程可能对测定结果产生影响。常规做法是将样品直接称于小烧杯中，用甲醇溶解后转移至量瓶中，淌洗烧杯几次，合并淌洗液于量瓶中，最后定容。，加甲醇约20ml，振摇5min，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，静置30min，作为供试品溶液；另取双氢青蒿素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.8mg的溶液，静置30min，作为对照溶液。精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以α异构体和β异构体的峰面积之和计算供试品中 是直接称入量瓶中吗，还是称量后直接转入量瓶中，此处作者表述欠清楚，因为此过程可能对测定结果产生影响。常规做法是将样品直接称于小烧杯中，用甲醇溶解后转移至量瓶中，淌洗烧杯几次，合并淌洗液于量瓶中，最后定容。 2 测量不确定度的分析 2.1 测量不确定度的构成及相对合成标准不确定度的数学表达式 根据HPLC外标法以峰面积计算含量的基本原理，双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素含量的数学表达式为： （1） 式中，X为双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素的含量（mg/片），为HPLC法的校正因子（mg·ml-1），AX为供试品溶液中双氢青蒿素的峰面积，VX为供试品溶液的体积（ml），为平均片重（g/片），mX为供试品重（g）。 由（1）式可知，X的测量不确定度由彼此独立的、AX、VX、和mX的测量不确定度构成，即HPLC法测定双氢青蒿素哌喹片中双氢青蒿素含量的相对合成标准不确定度由、urel(AX)、urel(VX)、urel(mX) 和 共5个不确定度分量构成，其数学表达式为[9]： （2） 2.2 不确定度分量的评定 2.2.1 HPLC法校正因子的相对标准不确定度 因为，其