对照品溶液的制备.ppt

示差折光检测器 原理：组分和流动相折光率之差进行检测 特点：通用型的检测器，但灵敏度低，不能用于痕量分析，不适合梯度洗脱 适用性：糖类、甾体类 荧光检测器 灵敏度比紫外检测器高，但只适用于能产生荧光或衍生物能产生荧光的物质 常用于氨基酸、多环芳烃、酶及甾体化合物等 2. 系统适用性实验 包括色谱柱的理论板数、分离度、灵敏度、重复性和拖尾因子五个指标。其中分离度和重复性更具实用意义。 系统适应性试验即用各品种项下规定的对照品和条件对色谱系统进行试验，应符合要求。否则可对色谱分离条件作适当的调整。 （1）理论板数（n）考察柱效 （2）分离度（R） 考察分离效果 除另有规定，待测峰与相邻峰的分离度应大于1.5。 （3）灵敏度 定性：信噪比不低于3；定量：信噪比不低于10 （4）重复性 考察测量的精密度 在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样3～5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0％。 （5）拖尾因子（T） T应在0.95～1.05之间 式中: W0.05h为0.05峰高处的峰宽； d1为峰极大至峰前沿之间的距离。 h 0.05h W0.05h d1 3.定量方法 （1）内标法 内标加校正因子法 各品种项下的规定，精密称（量）取对照品（ R）和内标物质（S），分别配成溶液，精密量取各适量，混合配成校正因子测定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子： 再取含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量 操作：配制一系列不同浓度的对照品溶液，其中加入等量的内标物，在相同的条件下，分别测定各浓度下对照品和内标物的峰面积的比值，再以峰面积的比值对对照品的浓度制作标准曲线。在待测样品中加入相同量的内标物，在完全相同的实验条件下测定，得到待测组分和内标物的峰面积。根据标准曲线计算待测组分的浓度。 特点：避免因样品前处理及进样体积误差对测定结果造成的影响。 标准曲线 内标标准曲线法 （2）外标法 外标标准曲线法 外标一点法 标准曲线 Ax Cx （二）气相色谱法 适用性： 挥发油及其他挥发性组分的含量测定，还可用于水分、乙醇量的测定。 特点： 优点：分离效能高、选择性好、灵敏度高、速度快 缺点：对挥发性差或遇热易分解破坏的物质难以分析 分类 1.按固定相状态分类：气固GC、气液GC 2.按分离原理分类：吸附GC、分配GC 3.按色谱柱分类：填充柱GC、毛细管柱GC 1.色谱条件选择 （1）固定相 固体吸附剂：高分子多孔小球、分子筛等，用于水分和含羟基（醇）化合物的测定。 固定液： 甲基聚硅氧烷（非极性，如DB-1） 5%苯基-95%甲基聚硅氧烷（弱极性，如DB-5）50%苯基-50%甲基聚硅氧烷（中等极性，如DB-17） 聚乙二醇（极性，如PEG-20M） 通常根据试样的极性，依据相似相溶的原则来选择固定液的种类。 （2）载气 中药分析中，氢焰检测器最常用，因此除另有规定外，常用氮气为载气。 （3）进样方式和进样量 直接进样：进样量一般不超过数微升；采用毛细管柱时，一般应采用分流进样以避免进样量过载 顶空进样：适用于固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定 （4）检测器：除另有规定外，一般用火焰离子化检测器，用氢气作为燃气，空气作为助燃气 （5）温度 柱温 恒温：适于窄沸程样品； 根据沸点选择柱温 程序升温：适于宽沸程样品 各部分温度控制 气化室：采用样品的沸点或略高于沸点温度（不超过沸点50℃） 检测室的温度通常高于柱温30℃左右或等于气化室温度 （三）薄层扫描法 1．薄层扫描法分类 按照检测方法 薄层吸收扫描法---可见、紫外区有吸收 薄层荧光扫描法---有荧光的组分　　 按照扫描方式 单波长扫描---适用于分离度好，背景干扰小 双波长扫描---适用于分离度较差、组分间相互干扰的薄层板 按照扫描时光束的轨迹 线性扫描---适用于形状规则的斑点扫描，主要用于薄层荧光扫描法 锯齿扫描---适用于形状不规则或分布不均匀的斑点 2.定量原理 （1）薄层吸收扫描 存在散射，不符合Lambert-Beer定律，需进行校正后使用 （2）薄层荧光扫描 3、定量方法 TLCS含量测定有外标法和内标法，中国药典仅采用外标法。 外标法又分为外标一点法和外标两点法。 外标两点法 外标一点法 外标一点法的直线方程： C = F A F 为斜率外标两点法的直线方程：  、 F1为斜率 F2为截距 （四）