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微生物限度检验方法验证 2007.4 微生物限度检查(Microbial Limits Test) ： 细菌、霉菌及酵母菌计数 控制菌检查(EP) 控制菌检查(USP) 控制菌的检测(中国药典05版) 05版微生物限度检查法与英美比较 验证目的 - 在于确认（寻找）一种有效的检验方法，如果样品（药品）中有一定数量的微生物存在，那么采用此法可以使得样品（药品）中的微生物得以检出。 - 充分验证样品（药品）本身对微生物生长的影响。 验证目的 确认一种检验方法。 验证实验 检验条件 检验方法 影响微生物检验的因素 - 样品/药品自身的特殊性 - 样品/药品中添加的防腐剂/抑菌剂 - 培养基的特性 - 培养条件 - 人员因素 - 实验器材的选择 恢复试验 - 微生物方法验证的实质就是评价和考察微生物恢复试验（恢复生长）的可信度。 - 恢复试验就是确认某一检验方法，它可以使加入其中的各种微生物都能够恢复生长。 验证内容 （一）计数方法验证 （二）控制菌检验方法验证 微生物限度检验方法验证 （一）计数方法验证 供试液制备（ 中国药典2005版） - 表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。 - 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。 - 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 - 供试液的体积：100ml。 稀释剂（ 中国药典2005版） （1） pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液 （2） pH6.8无菌磷酸盐缓冲液 （3） pH7.6无菌磷酸盐缓冲液 固体：10g 供试品+稀释剂至100ml 液体：10ml供试品+稀释剂至100ml 微生物计数方法验证菌种选择原则 普遍性 - G+、 G-、 -杆菌（长、短杆菌） -球菌 -真菌（丝状真菌、酵母菌） 特殊性 - 从环境中分离出来的常见杂菌 - 从样品中分离出来的常见杂菌 微生物计数方法验证用菌株： 中国药典2005版 菌株名称 CMCC编号 培养条件 大肠埃希氏菌(E. coli) CMCC(B)44102 金黄色葡萄球菌(Sta. aureus) CMCC(B)26003 枯草芽孢杆菌（Bac. subtilis） CMCC(B)63501 白色念珠菌(Can. albicans) CMCC(F)98001 黑曲霉菌(Asp. niger) CMCC(F)98003 微生物计数方法验证用菌株： USP29版 菌株名称 ATCC编号 培养条件 大肠埃希氏菌(Escherichia coli) ATCC 8739 32 +2.5℃ 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ATCC 6538 32 +2.5℃ 铜绿假单胞菌(Staphylococcus aureus) ATCC9027 32 +2.5℃ 生孢梭菌(Clostridium sporogenes) ATCC11437 32 +2.5℃ 枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis) ATCC6633 22 +2.5℃ 白色年珠菌(Candida albicans) ATCC10231