细菌革兰氏染色.pptVIP

细菌普通染色 和革兰氏染色 材料用具 显微镜，擦镜纸，纱布 革兰氏染液 香柏油,自来水,95%酒精; 载玻片,插镜纸,接种环,镊子,酒精灯; 金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,未知菌12小时的液体培养液 大肠杆菌和酵母菌平板 实验步骤 1.涂片 左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中去菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜; 从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少量菌体,涂抹均匀于玻片上预先滴有的一滴自来水中; 实验步骤 2.干燥 在空气中自然干燥或在火焰快速通过干燥(与热固定同步进行). 3.热固定 用镊子夹住涂片一端,在火焰上连续通过几次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜. 实验步骤 4.染色 在固定的标本上加结晶紫染液1-2滴,染色1min,轻轻滴加水洗; 吸干, 加半滴水, 盖上盖玻片, 滴上半滴镜油油镜检。(到此实际上即为细菌普通染色) 揭去盖玻片,吸干水, 滴加1-2滴革氏碘液媒染1min, 轻轻水洗,吸干。 实验步骤 滴加95%乙醇溶液(或30%丙酮乙醇脱色),轻轻摇动玻片至液滴无色,不要过分脱色(约30秒),立即轻轻滴加水洗;吸干。 滴加蕃红染液复染3min,轻轻滴加水洗; 吸干载玻片背面及标本周围水渍,滴上半滴水，盖上盖玻片,油镜镜检; 实验步骤 5.镜检 注意标本中细菌的形态,大小,排列,和颜色. 革兰氏阳性菌为紫色; 革兰氏阴性菌为红色; 金黄色葡萄球菌(24hrs)染色结果 金黄色葡萄球菌(48hrs)染色结果 金黄色葡萄球菌(72hrs)染色结果 大肠杆菌(24hrs)染色结果 讨论 记录并描绘革兰氏染色结果, 注意形状,排列和颜色, 看看与理论上是否相同;如不同,分析原因; 分析影响革兰氏染色结果的因素; 酵母菌能进行染色吗?结果如何?为什么? 注意事项 干净的载玻片, 合适取菌量, 菌龄, 热固定,每一步水洗要彻底而且吸干,和酒精脱色程度是实验成功的关键 禁止把染液倒入水池中,回收到废液桶中 实验三结束，准备实验四 肉汤蛋白胨培养基的配制（按实验指导61页配方琼脂为2％）。400ml/组置500ml三角烧瓶中用封口膜封好瓶口，用记号笔在瓶上标明培养基名称、组号（如周次－座次，1－3－2）、配制时间，高压灭菌。 包平皿10个/包/组、试管4支/包/组、1ml枪头2个/包/组、5 ml枪头1个/包/组、涂布器1个/包/组，高压灭菌。 洗平皿10个/组。 说明：以上内容全班交叉进行。 * * 目的要求 a. 掌握细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤和关键点 b. 掌握革兰氏染色法的步骤和关键点 c. 识别细菌的革兰氏染色结果并画图 d. 学习无菌操作技术 *